隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)的不斷發(fā)展及實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷進(jìn)步,古DNA研究已經(jīng)廣泛應(yīng)用于考古學(xué)、人類學(xué)、生物學(xué)及遺傳學(xué)等諸多領(lǐng)域,為考古發(fā)掘出的古代人物的身份鑒定、人類的演化遷徙、生物的起源進(jìn)化及疾病的遺傳流行等提供了分子生物學(xué)上的證據(jù)。在釉質(zhì)發(fā)生的早期階段,釉質(zhì)中的蛋白質(zhì)含量高達(dá)20%³0%。其中,釉原蛋白是釉質(zhì)發(fā)育過程中最為豐富的蛋白成分,在釉質(zhì)礦化的第一階段占釉基質(zhì)的60%⁹0%。在釉質(zhì)的形成過程中,釉原蛋白作為最主要的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白可能在釉質(zhì)微觀結(jié)構(gòu)模式形成和演化過程中扮演了重要的角色。釉原蛋白基因在不同種屬中均有表達(dá),被看做種系發(fā)生分化的一個(gè)重要標(biāo)志物。人類釉原蛋白基因是分別位于X和Y染色體上的一對(duì)等位基因,其在兩條性染色體上的不同表達(dá)成為性別鑒定的重要方法。本課題建立了一種利用古人類牙齒提取基因組DNA的簡(jiǎn)便方法,從西安地區(qū)出土3000年前人牙齒中提取出基因組DNA,設(shè)計(jì)釉原蛋白基因特異性引物,采用PCR技術(shù)對(duì)所選樣本進(jìn)行了性別鑒定,同時(shí)對(duì)西安地區(qū)出土3000年前人釉原蛋白基因高可變區(qū)變異位點(diǎn)進(jìn)行了篩查,并比較了西安地區(qū)出土3000年前人與現(xiàn)... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

所選牙齒樣本照片

樣本 A260 A280 260/280 濃度(ng/μl)M207 0.372 0.351 1.06 18.6M328 0.308 0.251 1.23 15.4T 0.348 0.275 1.27 17.4N1 0.318 0.249 1.28 15.9N2 2.604 2.184 1.19 130.23.2 電泳結(jié)果圖 2 是不同年代牙齒樣本 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳結(jié)果，5 個(gè)樣本均出現(xiàn)陽性特異性條帶，其中樣本 N2 條帶較亮。在對(duì)樣本殘存牙髓組織及牙本質(zhì)碎屑的收集過程中發(fā)現(xiàn)樣本 N2 尚有成型的干尸狀牙髓組織，而其它樣本均為碎末狀牙髓、牙本質(zhì)混合組織，因此也說明含有較豐富細(xì)胞成分的牙髓組織比細(xì)胞成分含量較少的牙本質(zhì)碎屑更容易提取到 DNA 片段。

圖 3 釉原蛋白基因內(nèi)含子 1 區(qū)正向測(cè)序圖形圖 4 釉原蛋白基因內(nèi)含子 1 區(qū)反向測(cè)序圖形4 討論牙釉質(zhì)的主要成分是羥磷灰石晶體，其硬度約為洛氏硬度值 340，相當(dāng)于牙本質(zhì)硬度（70KHN）的 5 倍，是人體中最硬的組織[111]。在考古發(fā)掘出的古人類遺骸中，牙齒是保存最完整的人體組織。同時(shí)，牙髓腔是一個(gè)密閉的結(jié)構(gòu)，除根尖孔外不與外界環(huán)境相通，避免了環(huán)境變化對(duì)古 DNA 的影響，也減少了古 DNA 受污染的機(jī)會(huì)[24]。然而，傳統(tǒng)的從牙齒中提取 DNA的方法是將牙齒進(jìn)行表面的去污染處理后用液氮研磨機(jī)將其研磨成牙粉以

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]單核苷酸多態(tài)性的特點(diǎn)及其在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 席素雅,韓雅玲.  遼寧醫(yī)學(xué)雜志. 2007(01)
[2]考古樣品中Amelogenin同源基因的提取和檢測(cè)[J]. 張虎勤,楊周岐,劉芳娥,張金,趙文明.  法醫(yī)學(xué)雜志. 2006(03)
[3]孕婦血漿Amelogenin基因6bp差異檢測(cè)對(duì)產(chǎn)前胎兒性別的鑒定價(jià)值[J]. 鹿亞超,朱斌,姜海燕,王麗娟,高錦聲.  蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2005(03)
[4]X染色體與性別鑒定[J]. 呂梅勵(lì),吳梅筠,梁偉波,張林.  刑事技術(shù). 2004(01)
[5]一種高效的樹木總DNA提取方法[J]. 張博,張露,諸葛強(qiáng),王明庥,黃敏仁.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2004(01)
[6]人類SNP多態(tài)性的研究及應(yīng)用[J]. 張鳳珍,郝崗平,張媛英.  泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2003(02)
[7]法醫(yī)人類學(xué)研究進(jìn)展[J]. 陳華.  解剖學(xué)研究. 2002(04)
[8]古代DNA研究實(shí)驗(yàn)技術(shù)[J]. 楊淑娟,賴旭龍,唐先華,盛桂蓮.  遺傳. 2002(05)
[9]單核苷酸多態(tài)性的研究進(jìn)展[J]. 楊昭慶,洪坤學(xué).  國外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè). 2000(01)
[10]方興未艾的古代DNA的研究[J]. 蔡勝和,楊煥明.  遺傳. 2000(01)



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