ⅣfimA型牙齦卟啉單胞菌重組菌毛蛋白誘導(dǎo)HUVECs天然免疫反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究
發(fā)布時(shí)間：2021-06-22 21:57
目的：通過(guò)研究TLRs阻斷劑對(duì)P. gingivalis誘發(fā)HUVECs炎癥反應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游信號(hào)分子及HUVEC分泌炎性因子的影響,探討P. gingivalis影響和調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞天然免疫和炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,并為As及其相關(guān)CVD的防治提供新的思路。方法：標(biāo)準(zhǔn)條件下厭氧培養(yǎng)ⅣfimA型P. gingivalis（W83）,收集菌液提取細(xì)菌DNA,克�、鬴imA型P. gingivalis（W83）的fimA序列,構(gòu)建fimA的原核表達(dá)系統(tǒng)pET-30a-FimA BL21DE3, IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組菌毛蛋白rFimA;體外培養(yǎng)HUVECs,待HUVECs單層融合后,分別加入anti-TLR2單克隆抗體和anti-TLR4單克隆抗體孵育30min后,再加入不同濃度的Ⅳ型rFimA,共同培養(yǎng)2h、6h和24h,采用RT-PCR檢測(cè)TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路接頭分子MyD88及HUVECs中致炎細(xì)胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）,趨化因子（IL-8和MCP-1）,粘附分子（ICAM-1和VCAM-1）的mRNA表達(dá)水平；IHC定性分析NF-κB的核移位；ELISA法測(cè)...
【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省
【文章頁(yè)數(shù)】：113 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
BHI血瓊脂平板r的P.RinAivalis呈黑色、圓形凸起的光滑菌落
尸gingivalis在BHI血瓊脂平板上，呈現(xiàn)黑色凸起、表面光滑、邊界清楚的圓形菌落(見圖圖1一 33BHI血瓊脂平板卜的尸夢(mèng)卿valis呈黑色、圓形凸起的光滑菌落口...‘，，，·奮t毛獷.少.匕，口p.口、了.產(chǎn)、圖1一34尸鄉(xiāng)卿vali，革蘭染色光鏡下呈革蘭陰性球桿菌10x100倍
△△Ct=(Ct^目的基因一Ct^內(nèi)參基因)一(CtB目的基因一CtB內(nèi)參基因)TLRZ阻斷劑作用于不同濃度IV型rFilnA蛋白刺激HUVECs，細(xì)胞表達(dá)IL一lpmRNA如表1一2和圖1一37所示，經(jīng)ANOVA一LSD多重比較分析顯示:Tz、TZ、T3組在Zh、6h、24h時(shí)，IL一lpmRNA相對(duì)表達(dá)量與陽(yáng)性和陰性對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.OS)。表1一 2TLRZ阻斷劑作用于不同濃度W型rFIlllA刺激HIJvECs表達(dá)IL一lplllRNA水平的比較IL一lpmRNA的相對(duì)表達(dá)量組別一一一一石廠一—下訂一一一一一-一一-—-三麗一一-一一一一一陰性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照 1.330士0.095 0.743士0.083 1.135士0.08] 1.573士0.064].517士0.043 1.244士0.108 1.396士0.161 1.197士0.299 1.292士0.085 1.454士0.135 1.511士0.210 1.799士0.022 1.455士0.262 1.539士0.157 2.020士0.168 T]TZT3TLRZ阻斷劑作用于不同濃度IV型rFiniA刺激Ht氏舊Cs表達(dá)ILlpzl識(shí)NA水平的比較 2.5—口陰性對(duì)照組目陽(yáng)性對(duì)照組.TI’口TZ.T3淚那嚼藺==交z“呼任，三6h時(shí)間圖1一 37TLRZ阻斷劑作用于不同濃度IV型rFimA刺激HUVEcs表達(dá)IL一甲mRNA水平的比較 2.4.2TLRZ阻斷劑對(duì)不同濃度W型rFin1A刺激HUVECs表達(dá)IL一 6mRNA的影響在本實(shí)驗(yàn)條件下，各實(shí)驗(yàn)組中 HuvEcSIL一6基因和GAPDH內(nèi)參基因的mRNA表達(dá)均以Ct值表示。根據(jù)樣本Ct值以內(nèi)參基因GAPDH的Ct值對(duì)IL一6拷貝數(shù)加以校正，計(jì)算得到樣本中IL一6的拷貝數(shù)△Ct值。實(shí)驗(yàn)組間 HUVECSIL一 6mRNA相對(duì)表
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牙周疾病與心血管疾病的相關(guān)性[J]. Mariano Sanz,Francesco D’ Aiuto,John Deanfield,Francisco Fernandez-Avilés,陳明,謝良地. 中華高血壓雜志. 2010(07)
[2]口腔致病菌與動(dòng)脈粥樣硬化的研究進(jìn)展[J]. 張明珠,梁景平. 國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2008(01)
[3]不同fimA基因型牙齦卟啉單胞菌在慢性牙周炎患者中的分布[J]. 郭永華,吳亞菲,劉天佳,肖曉蓉,周斌,周雪平. 華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2005(02)
本文編號(hào)：3243593
【文章來(lái)源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省
【文章頁(yè)數(shù)】：113 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
BHI血瓊脂平板r的P.RinAivalis呈黑色、圓形凸起的光滑菌落
尸gingivalis在BHI血瓊脂平板上，呈現(xiàn)黑色凸起、表面光滑、邊界清楚的圓形菌落(見圖圖1一 33BHI血瓊脂平板卜的尸夢(mèng)卿valis呈黑色、圓形凸起的光滑菌落口...‘，，，·奮t毛獷.少.匕，口p.口、了.產(chǎn)、圖1一34尸鄉(xiāng)卿vali，革蘭染色光鏡下呈革蘭陰性球桿菌10x100倍
△△Ct=(Ct^目的基因一Ct^內(nèi)參基因)一(CtB目的基因一CtB內(nèi)參基因)TLRZ阻斷劑作用于不同濃度IV型rFilnA蛋白刺激HUVECs，細(xì)胞表達(dá)IL一lpmRNA如表1一2和圖1一37所示，經(jīng)ANOVA一LSD多重比較分析顯示:Tz、TZ、T3組在Zh、6h、24h時(shí)，IL一lpmRNA相對(duì)表達(dá)量與陽(yáng)性和陰性對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.OS)。表1一 2TLRZ阻斷劑作用于不同濃度W型rFIlllA刺激HIJvECs表達(dá)IL一lplllRNA水平的比較IL一lpmRNA的相對(duì)表達(dá)量組別一一一一石廠一—下訂一一一一一-一一-—-三麗一一-一一一一一陰性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照 1.330士0.095 0.743士0.083 1.135士0.08] 1.573士0.064].517士0.043 1.244士0.108 1.396士0.161 1.197士0.299 1.292士0.085 1.454士0.135 1.511士0.210 1.799士0.022 1.455士0.262 1.539士0.157 2.020士0.168 T]TZT3TLRZ阻斷劑作用于不同濃度IV型rFiniA刺激Ht氏舊Cs表達(dá)ILlpzl識(shí)NA水平的比較 2.5—口陰性對(duì)照組目陽(yáng)性對(duì)照組.TI’口TZ.T3淚那嚼藺==交z“呼任，三6h時(shí)間圖1一 37TLRZ阻斷劑作用于不同濃度IV型rFimA刺激HUVEcs表達(dá)IL一甲mRNA水平的比較 2.4.2TLRZ阻斷劑對(duì)不同濃度W型rFin1A刺激HUVECs表達(dá)IL一 6mRNA的影響在本實(shí)驗(yàn)條件下，各實(shí)驗(yàn)組中 HuvEcSIL一6基因和GAPDH內(nèi)參基因的mRNA表達(dá)均以Ct值表示。根據(jù)樣本Ct值以內(nèi)參基因GAPDH的Ct值對(duì)IL一6拷貝數(shù)加以校正，計(jì)算得到樣本中IL一6的拷貝數(shù)△Ct值。實(shí)驗(yàn)組間 HUVECSIL一 6mRNA相對(duì)表
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牙周疾病與心血管疾病的相關(guān)性[J]. Mariano Sanz,Francesco D’ Aiuto,John Deanfield,Francisco Fernandez-Avilés,陳明,謝良地. 中華高血壓雜志. 2010(07)
[2]口腔致病菌與動(dòng)脈粥樣硬化的研究進(jìn)展[J]. 張明珠,梁景平. 國(guó)際口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2008(01)
[3]不同fimA基因型牙齦卟啉單胞菌在慢性牙周炎患者中的分布[J]. 郭永華,吳亞菲,劉天佳,肖曉蓉,周斌,周雪平. 華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2005(02)
本文編號(hào)：3243593
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