口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）為口腔惡性腫瘤的主要類(lèi)型,與遷延的慢性口腔炎癥密切相關(guān)。近年來(lái)雖然治療上取得一定進(jìn)展,但由于原發(fā)部位延遲診斷、頻繁的局部復(fù)發(fā)以及治療后的頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,5年生存率仍然較低。實(shí)驗(yàn)室前期對(duì)同一病人來(lái)源的口腔扁平苔蘚（oral lichen planu,OLP）和OSCC組織測(cè)序發(fā)現(xiàn),相較于正�？谇火つ�,WNT信號(hào)通路配體WNT7B的表達(dá)在OLP、OSCC臨床樣本中呈現(xiàn)遞增趨勢(shì)。為探討WNT7B在口腔慢性炎癥和癌癥發(fā)展中的作用,本課題選擇腫瘤細(xì)胞與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor-associated macrophages,TAMs）之間的相互調(diào)節(jié)機(jī)制作為切入點(diǎn),嘗試探討WNT7B是否參與OSCC細(xì)胞與TAMs細(xì)胞之間的信息交互。本文主要從以下幾個(gè)部分開(kāi)展研究:第一部分,WNT7B參與OLP和OSCC發(fā)展過(guò)程的臨床驗(yàn)證。綜合前期兩位OSCC病人轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)以及GEO（gene expression omnibus,GEO）下載的三位病人的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析,并結(jié)合臨床病人組織qPCR及免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)WNT7B... 

【文章來(lái)源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

同一病人來(lái)源的癌旁正常組織、OLP和OSCC轉(zhuǎn)錄組測(cè)序中WNT7BmRNA的豐度

電子科技大學(xué)碩士學(xué)位論文22位），用來(lái)表示基因mRNA的豐度。同一病人來(lái)源的癌旁正常組織、OLP組織和OSCC組織的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)顯示：WNT7BmRNA在各組織中的豐度出現(xiàn)遞增趨勢(shì)。圖3-1同一病人來(lái)源的癌旁正常組織、OLP和OSCC轉(zhuǎn)錄組測(cè)序中WNT7BmRNA的豐度3.2.2臨床病人WNT7BmRNA表達(dá)水平驗(yàn)證為驗(yàn)證上述測(cè)序結(jié)果，我們收集了21例新鮮的臨床病人的OSCC組織及其對(duì)應(yīng)的癌旁正常組織，以及22例OLP組織，借助實(shí)時(shí)熒光定量qPCR檢測(cè)了WNT7B在以上組織中mRNA水平上的表達(dá)情況。如圖3-2所示：在臨床病人的新鮮組織樣本中，WNT7BmRNA在OSCC組織中顯著高于癌旁正常組織和OLP組織，差異具有顯著性。但相對(duì)于癌旁正常組織，OLP中WNT7BmRNA豐度沒(méi)有顯著差異�？紤]到組織提取RNA時(shí)，炎癥組織里實(shí)際包含了很多粘膜下的結(jié)締組織成分，由此猜測(cè)在OLP中可能出現(xiàn)mRNA水平和蛋白水平的結(jié)果分離現(xiàn)象。圖3-2臨床病人組織WNT7BmRNA表達(dá)情況**：P<0.01

第三章WNT7B在OLP慢性炎癥與OSCC發(fā)展中的作用233.2.3WNT7B蛋白在癌旁正常組織與OLP和OSCC組織中的表達(dá)為進(jìn)一步驗(yàn)證WNT7B蛋白在組織水平的表達(dá)情況，我們收集了17例OSCC病人的癌癥組織和癌旁正常組織，以及14例OLP病人組織的石蠟包埋樣本，借助免疫組化技術(shù)檢測(cè)其表達(dá)情況。免疫組化技術(shù)利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來(lái)確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），來(lái)對(duì)其進(jìn)行定位、定性及相對(duì)定量的研究。圖3-3WNT7B蛋白在病人組織中的表達(dá)情況。左圖為不同組織中WNT7B蛋白IHC染色結(jié)果，黃色箭頭所示為OSCC組織中的巨噬細(xì)胞，其胞漿中出現(xiàn)較強(qiáng)的WNT7B陽(yáng)性信號(hào)。ScaleBar=100μm。右側(cè)圖為各組計(jì)算免疫組化評(píng)分后的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，**：P<0.01；***：P<0.005；****：P<0.001。如圖3-3所示，癌旁正常組織中，上皮細(xì)胞基本為陰性。而在OLP組織中，上皮組織呈增生狀態(tài)，上皮增厚，細(xì)胞形態(tài)變圓，細(xì)胞連接相對(duì)表現(xiàn)松散；增生的上皮細(xì)胞中，WNT7B可見(jiàn)于大多數(shù)細(xì)胞的胞漿和胞膜。在OSCC中，WNT7B陽(yáng)性信號(hào)見(jiàn)于絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞胞漿中，陽(yáng)性程度高。免疫組化評(píng)分提示OSCC陽(yáng)性計(jì)分值在癌旁正常組織-OLP炎癥組織-OSCC癌癥組織中呈遞增趨勢(shì)，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。更有意思的是，OSCC組織中，我們發(fā)現(xiàn)組織中存在巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，其細(xì)胞核為典型的馬蹄形，而細(xì)胞胞漿和胞膜中都出現(xiàn)較強(qiáng)的WNT7B陽(yáng)性信號(hào)。這提示我們，可能WNT7B會(huì)是腫瘤細(xì)胞與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞間的信息交互分子之一。


本文編號(hào)：3225459