WNT7B介導(dǎo)的口腔鱗癌腫瘤細(xì)胞與巨噬細(xì)胞信息交互初步研究
發(fā)布時間：2021-06-11 23:18
口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）為口腔惡性腫瘤的主要類型,與遷延的慢性口腔炎癥密切相關(guān)。近年來雖然治療上取得一定進展,但由于原發(fā)部位延遲診斷、頻繁的局部復(fù)發(fā)以及治療后的頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,5年生存率仍然較低。實驗室前期對同一病人來源的口腔扁平苔蘚（oral lichen planu,OLP）和OSCC組織測序發(fā)現(xiàn),相較于正�？谇火つ�,WNT信號通路配體WNT7B的表達在OLP、OSCC臨床樣本中呈現(xiàn)遞增趨勢。為探討WNT7B在口腔慢性炎癥和癌癥發(fā)展中的作用,本課題選擇腫瘤細(xì)胞與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（tumor-associated macrophages,TAMs）之間的相互調(diào)節(jié)機制作為切入點,嘗試探討WNT7B是否參與OSCC細(xì)胞與TAMs細(xì)胞之間的信息交互。本文主要從以下幾個部分開展研究:第一部分,WNT7B參與OLP和OSCC發(fā)展過程的臨床驗證。綜合前期兩位OSCC病人轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)以及GEO（gene expression omnibus,GEO）下載的三位病人的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析,并結(jié)合臨床病人組織qPCR及免疫組織化學(xué)實驗,發(fā)現(xiàn)WNT7B...
【文章來源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：56 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
同一病人來源的癌旁正常組織、OLP和OSCC轉(zhuǎn)錄組測序中WNT7BmRNA的豐度
電子科技大學(xué)碩士學(xué)位論文22位），用來表示基因mRNA的豐度。同一病人來源的癌旁正常組織、OLP組織和OSCC組織的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)顯示：WNT7BmRNA在各組織中的豐度出現(xiàn)遞增趨勢。圖3-1同一病人來源的癌旁正常組織、OLP和OSCC轉(zhuǎn)錄組測序中WNT7BmRNA的豐度3.2.2臨床病人WNT7BmRNA表達水平驗證為驗證上述測序結(jié)果，我們收集了21例新鮮的臨床病人的OSCC組織及其對應(yīng)的癌旁正常組織，以及22例OLP組織，借助實時熒光定量qPCR檢測了WNT7B在以上組織中mRNA水平上的表達情況。如圖3-2所示：在臨床病人的新鮮組織樣本中，WNT7BmRNA在OSCC組織中顯著高于癌旁正常組織和OLP組織，差異具有顯著性。但相對于癌旁正常組織，OLP中WNT7BmRNA豐度沒有顯著差異�？紤]到組織提取RNA時，炎癥組織里實際包含了很多粘膜下的結(jié)締組織成分，由此猜測在OLP中可能出現(xiàn)mRNA水平和蛋白水平的結(jié)果分離現(xiàn)象。圖3-2臨床病人組織WNT7BmRNA表達情況**：P<0.01
第三章WNT7B在OLP慢性炎癥與OSCC發(fā)展中的作用233.2.3WNT7B蛋白在癌旁正常組織與OLP和OSCC組織中的表達為進一步驗證WNT7B蛋白在組織水平的表達情況，我們收集了17例OSCC病人的癌癥組織和癌旁正常組織，以及14例OLP病人組織的石蠟包埋樣本，借助免疫組化技術(shù)檢測其表達情況。免疫組化技術(shù)利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），來對其進行定位、定性及相對定量的研究。圖3-3WNT7B蛋白在病人組織中的表達情況。左圖為不同組織中WNT7B蛋白IHC染色結(jié)果，黃色箭頭所示為OSCC組織中的巨噬細(xì)胞，其胞漿中出現(xiàn)較強的WNT7B陽性信號。ScaleBar=100μm。右側(cè)圖為各組計算免疫組化評分后的統(tǒng)計結(jié)果，組間采用獨立樣本t檢驗，**：P<0.01；***：P<0.005；****：P<0.001。如圖3-3所示，癌旁正常組織中，上皮細(xì)胞基本為陰性。而在OLP組織中，上皮組織呈增生狀態(tài)，上皮增厚，細(xì)胞形態(tài)變圓，細(xì)胞連接相對表現(xiàn)松散；增生的上皮細(xì)胞中，WNT7B可見于大多數(shù)細(xì)胞的胞漿和胞膜。在OSCC中，WNT7B陽性信號見于絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞胞漿中，陽性程度高。免疫組化評分提示OSCC陽性計分值在癌旁正常組織-OLP炎癥組織-OSCC癌癥組織中呈遞增趨勢，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。更有意思的是，OSCC組織中，我們發(fā)現(xiàn)組織中存在巨噬細(xì)胞浸潤，其細(xì)胞核為典型的馬蹄形，而細(xì)胞胞漿和胞膜中都出現(xiàn)較強的WNT7B陽性信號。這提示我們，可能WNT7B會是腫瘤細(xì)胞與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞間的信息交互分子之一。
本文編號：3225459
【文章來源】：電子科技大學(xué)四川省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：56 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
同一病人來源的癌旁正常組織、OLP和OSCC轉(zhuǎn)錄組測序中WNT7BmRNA的豐度
電子科技大學(xué)碩士學(xué)位論文22位），用來表示基因mRNA的豐度。同一病人來源的癌旁正常組織、OLP組織和OSCC組織的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)顯示：WNT7BmRNA在各組織中的豐度出現(xiàn)遞增趨勢。圖3-1同一病人來源的癌旁正常組織、OLP和OSCC轉(zhuǎn)錄組測序中WNT7BmRNA的豐度3.2.2臨床病人WNT7BmRNA表達水平驗證為驗證上述測序結(jié)果，我們收集了21例新鮮的臨床病人的OSCC組織及其對應(yīng)的癌旁正常組織，以及22例OLP組織，借助實時熒光定量qPCR檢測了WNT7B在以上組織中mRNA水平上的表達情況。如圖3-2所示：在臨床病人的新鮮組織樣本中，WNT7BmRNA在OSCC組織中顯著高于癌旁正常組織和OLP組織，差異具有顯著性。但相對于癌旁正常組織，OLP中WNT7BmRNA豐度沒有顯著差異�？紤]到組織提取RNA時，炎癥組織里實際包含了很多粘膜下的結(jié)締組織成分，由此猜測在OLP中可能出現(xiàn)mRNA水平和蛋白水平的結(jié)果分離現(xiàn)象。圖3-2臨床病人組織WNT7BmRNA表達情況**：P<0.01
第三章WNT7B在OLP慢性炎癥與OSCC發(fā)展中的作用233.2.3WNT7B蛋白在癌旁正常組織與OLP和OSCC組織中的表達為進一步驗證WNT7B蛋白在組織水平的表達情況，我們收集了17例OSCC病人的癌癥組織和癌旁正常組織，以及14例OLP病人組織的石蠟包埋樣本，借助免疫組化技術(shù)檢測其表達情況。免疫組化技術(shù)利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），來對其進行定位、定性及相對定量的研究。圖3-3WNT7B蛋白在病人組織中的表達情況。左圖為不同組織中WNT7B蛋白IHC染色結(jié)果，黃色箭頭所示為OSCC組織中的巨噬細(xì)胞，其胞漿中出現(xiàn)較強的WNT7B陽性信號。ScaleBar=100μm。右側(cè)圖為各組計算免疫組化評分后的統(tǒng)計結(jié)果，組間采用獨立樣本t檢驗，**：P<0.01；***：P<0.005；****：P<0.001。如圖3-3所示，癌旁正常組織中，上皮細(xì)胞基本為陰性。而在OLP組織中，上皮組織呈增生狀態(tài)，上皮增厚，細(xì)胞形態(tài)變圓，細(xì)胞連接相對表現(xiàn)松散；增生的上皮細(xì)胞中，WNT7B可見于大多數(shù)細(xì)胞的胞漿和胞膜。在OSCC中，WNT7B陽性信號見于絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞胞漿中，陽性程度高。免疫組化評分提示OSCC陽性計分值在癌旁正常組織-OLP炎癥組織-OSCC癌癥組織中呈遞增趨勢，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。更有意思的是，OSCC組織中，我們發(fā)現(xiàn)組織中存在巨噬細(xì)胞浸潤，其細(xì)胞核為典型的馬蹄形，而細(xì)胞胞漿和胞膜中都出現(xiàn)較強的WNT7B陽性信號。這提示我們，可能WNT7B會是腫瘤細(xì)胞與腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞間的信息交互分子之一。
本文編號：3225459
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