發(fā)布時(shí)間：2021-04-24 21:07

　　背景：NELL1，一種與人顱縫早閉癥（craniosynostosis,CS）顱縫過早融合相關(guān)的新型分泌型蛋白，能促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化。目的：研究NELL1對人牙周膜干細(xì)胞（humanperiodontalligamentstemcells,hPDLSC）體外成骨分化的作用并初步探討其作用機(jī)制。方法：構(gòu)建攜帶NELL1的慢病毒載體（lenti-NELL1），用以轉(zhuǎn)染hPDLSCs，經(jīng)礦化誘導(dǎo)液誘導(dǎo)培養(yǎng)后，通過檢測成骨標(biāo)志物堿性磷酸酶（alkalinephosphate,ALP）、骨鈣素（osteocalcin,OCN）及鈣沉積來評估NELL1對hPDLSCs的骨誘導(dǎo)作用。同時(shí)real-timePCR檢測成骨重要的轉(zhuǎn)錄因子（Msx2、Runx2）mRNA的表達(dá)變化。實(shí)驗(yàn)以只攜帶報(bào)告基因EGFP的空載體lenti-EGFP轉(zhuǎn)染的hPDLSCs為對照。結(jié)果：WesternBlot及real-timePCR證實(shí)構(gòu)建的lenti-NELL1轉(zhuǎn)染hADSCs能成功表達(dá)有生物學(xué)活性的NELL1蛋白。與對照相比，lenti-NELL1組ALP、OCN、鈣沉積及Msx2mRNA都顯著提高（p＜0.... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：111 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
實(shí)驗(yàn)一、人牙周膜干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及生物學(xué)特性的研究
    摘要
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
實(shí)驗(yàn)二、攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的慢病毒載體感染人牙周膜干細(xì)胞對其體外成骨分化影響的研究
    摘要
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
實(shí)驗(yàn)三、人NELL1基因慢病毒載體的構(gòu)建
    摘要
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
實(shí)驗(yàn)四、NELL1慢病毒載體轉(zhuǎn)染人牙周膜干細(xì)胞對其成骨分化影響的研究
    摘要
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
綜述一、慢病毒載體的研究進(jìn)展及應(yīng)用
    摘要
    1 慢病毒載體分子構(gòu)造
    2 慢病毒載體的遺傳毒性
    3 細(xì)胞工程應(yīng)用
    4 動(dòng)物模型應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)
綜述二、NELL1基因促進(jìn)成骨作用的研究及其應(yīng)用
    摘要
    1 NELL1基因的發(fā)現(xiàn)
    2 NELL1基因的結(jié)構(gòu)
    3 NELL1蛋白的結(jié)構(gòu)
    4 Nel1在小鼠骨骼發(fā)育中的作用
    5 NELL1促進(jìn)骨軟骨再生的應(yīng)用研究
    6 NELL1促進(jìn)成骨的可能機(jī)制
    參考文獻(xiàn)
附圖
個(gè)人簡歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]改良法分離培養(yǎng)人牙周膜干細(xì)胞[J]. 申濤,�；劬�,簡從相,楊彥春,周繼祥.  華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2011(01)
[2]MOI對HEK293細(xì)胞感染病毒后的生長代謝和腺病毒擴(kuò)增效率的影響[J]. 劉旭平,范里,朱明龍,張旭,譚文松.  高�；瘜W(xué)工程學(xué)報(bào). 2010(04)
[3]人牙周膜干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[J]. 潘峰,丁寅,王光,趙宇,倪華.  中國美容醫(yī)學(xué). 2008(05)
[4]谷氨酰胺限制對雜交瘤細(xì)胞生長、代謝和單抗生產(chǎn)的影響[J]. 張淑香,李東曉,朱明龍,譚文松,張嗣良.  高�；瘜W(xué)工程學(xué)報(bào). 2008(01)
[5]慢病毒載體在腫瘤基因治療中的應(yīng)用[J]. 李躍萍,宋麗萍,邱曙東.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2006(12)
[6]rCHO細(xì)胞在葡萄糖限制流加培養(yǎng)過程中的生長與代謝特性[J]. 高量,游磊,朱明龍,譚文松.  高�；瘜W(xué)工程學(xué)報(bào). 2006(01)
[7]不同張應(yīng)力對體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞形態(tài)和纖維型肌動(dòng)蛋白改變的影響[J]. 彭庭莉,楊軍,周繼祥,楊彥春.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2005(09)
[8]酶消化組織塊法原代培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞的初步研究[J]. 湯楚華,施生根,牛忠英,黨平,鄭燕華,史亮.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2004(08)

博士論文
[1]慢病毒載體法高效轉(zhuǎn)基因雞制備技術(shù)研究[D]. 徐世永.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3158077