本文關(guān)鍵詞：不同純鈦表面形貌對神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:目前,種植義齒因其具有良好的固位作用、避免鄰牙的損傷、美觀性等優(yōu)點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于牙列缺損和牙列缺失的臨床修復(fù)治療。然而與天然牙相比,種植體周圍沒有牙周膜、且缺乏牙周本體感受器,理論上缺乏與天然牙相似的感知能力,然而一些研究發(fā)現(xiàn)種植義齒患者有一定的感知覺,20世紀(jì)90年代“骨感知”理論被提出,它被認(rèn)為是在缺少牙周本體感受器的情況下機(jī)體特殊的感知功能。然而,由于這種感知能力的閾值高,使得患者較難意識到過大的咬合力,長期以往,將會造成種植體周圍骨質(zhì)的吸收、顳下頜關(guān)節(jié)病甚至種植體的折斷,最終導(dǎo)致種植失敗。因此研究種植體植入后周圍神經(jīng)的再生具有重要臨床意義。目的:本實(shí)驗(yàn)通過機(jī)械加工法(M)、噴砂酸蝕法(S)、電解蝕刻法(E)三種不同的方法制備純鈦試件,探討得到的三種不同純鈦表面形貌對神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,為研究促進(jìn)種植體周圍神經(jīng)再生提供客觀依據(jù)。方法:通過機(jī)械加工法(M)、噴砂酸蝕法(S)、電解蝕刻法(E)制備三種不同純鈦表面。使用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察不同表面微形貌特點(diǎn)。分別將RSC96細(xì)胞與各表面共培養(yǎng),免疫熒光染色法檢測細(xì)胞粘附情況,MTT法檢測其增殖情況,Real-time PCR檢測其腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)和神經(jīng)生長因子(NGF)基因表達(dá)水平;提取大鼠背根神經(jīng)元(DRGns),尼氏染色鑒定后,將其與試件共培養(yǎng),掃描電鏡檢測其粘附情況。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1、在掃描電子顯微鏡下,M、S、E三種表面的微形貌差異顯著,M組表面缺乏明顯的空間立體結(jié)構(gòu),表現(xiàn)為平行的條紋溝壑;S組表面存在大量的凹陷、窩洞及裂隙,孔洞直徑約400nm-5um不等,形狀不規(guī)則,大小及深淺不一,有的孔互聯(lián),邊緣較銳利,有殘余噴砂顆粒存在;E組表面呈現(xiàn)為均勻的淺凹碗狀微米孔,直徑20-50um、深度5-12um,在微米孔內(nèi)布滿了20-30nm納米突起。2、免疫熒光染色及SEM顯示,M、S、E三種表面上RSC96細(xì)胞均能粘附生長。M組,細(xì)胞數(shù)目少,多呈圓形,少數(shù)呈梭形,有較短突起;S組,細(xì)胞數(shù)多于M組,呈圓形的細(xì)胞較少,呈梭形的較多;E組,細(xì)胞數(shù)目最多,幾乎全部呈長梭形粘附于表面,細(xì)胞伸展更充分,偽足更長。3、MTT檢測表明,在RSC96細(xì)胞增殖的第1天,三組吸光度均值大小為E組S組M組,E組和M組之間、S組和M組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,E組和S組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;在第3天和第5天,三組之間的吸光度值均值大小為E組S組M組,但各組之間缺乏統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、Real-time PCR研究分析,在純鈦試件上培養(yǎng)RSC96細(xì)胞,第4天檢測到BDNF基因表達(dá)的相對量為E組S組M組,各組之均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;第7天BDNF基因表達(dá)的相對量為E組S組M組,E組和M組之間、E組和S組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,S組和M組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;第4天檢測到NGF基因表達(dá)的相對量為E組S組M組,E組和M組之間有統(tǒng)計(jì)意義,S組和M組之間、E組和S組之間均無統(tǒng)計(jì)意義;第7天NGF基因表達(dá)的相對量為E組S組M組,E組和M組之間有顯著性差異、S組和M組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,E組和S組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5、成功提取、鑒定大鼠背根神經(jīng)元,將其與純鈦試件共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示,背根神經(jīng)元在各組純鈦表面上均能夠粘附、存活、生長,M組表面上神經(jīng)元胞體呈橢圓形,有的伸出極短的偽足,未見明顯的神經(jīng)突起;S組表面上神經(jīng)元胞體呈扁平狀,位于不規(guī)則的凹陷或裂隙中,較M組伸出較長偽足,且可見較明顯的短神經(jīng)突起抓住孔壁;E組的神經(jīng)元胞體呈多邊形,飽滿,位于碗型的孔洞中,伸出很長很明顯的神經(jīng)突起,跨越一個或者多個孔并牢牢抓住孔壁,可見大量細(xì)胞外基質(zhì),細(xì)胞之間的聯(lián)系很緊密。結(jié)論:1、電解蝕刻技術(shù)可制得具有直徑20-50um、深度5-12um的較均勻微米級孔,內(nèi)布滿20-30nm納米突起的粗糙純鈦表面。2、電解蝕刻純鈦表面能夠促進(jìn)大鼠神經(jīng)膜細(xì)胞系RSC96細(xì)胞早期粘附、伸展;早期增殖;神經(jīng)營養(yǎng)因子基因的表達(dá)。3、在機(jī)械加工純鈦表面、噴砂酸蝕純鈦表面、電解蝕刻純鈦表面上,大鼠背根神經(jīng)元DRGns均能夠粘附、存活;且該神經(jīng)元在電解蝕刻表面上粘附、伸展更充分,細(xì)胞之間聯(lián)系更加緊密。
【關(guān)鍵詞】：純鈦表面形貌 電解蝕刻 RSC96細(xì)胞 大鼠背根神經(jīng)元 神經(jīng)營養(yǎng)因子基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R783.6
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-14
• 英文縮略詞表14-15
• 第1章 前言15-21
• 1.1 骨感知的研究背景及進(jìn)展15-16
• 1.2 周圍神經(jīng)再生的機(jī)制16-17
• 1.2.1 周圍神經(jīng)再生過程的研究16
• 1.2.2 種植體植入后種植體周圍神經(jīng)再生16-17
• 1.3 種植體表面對周圍神經(jīng)再生的影響17-19
• 1.4 種植體表面與周圍神經(jīng)再生的機(jī)制19-21
• 第2章 材料和方法21-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料21-23
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備、材料、試劑21-23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)動物、細(xì)胞系23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法23-34
• 2.2.1 純鈦試件的制備23-24
• 2.2.2 SEM觀察三種純鈦試件的表面形貌特點(diǎn)24
• 2.2.3 大鼠神經(jīng)膜細(xì)胞系RSC96的復(fù)蘇和培養(yǎng)24-25
• 2.2.4 免疫熒光及SEM觀察三種純鈦試件表面RSC96細(xì)胞的粘附25-26
• 2.2.4.1 免疫熒光觀察三種純鈦試件表面RSC96細(xì)胞的粘附25-26
• 2.2.4.2 SEM觀察三種純鈦試件表面RSC96細(xì)胞的形態(tài)26
• 2.2.5 MTT法檢測三種純鈦試件表面RSC96細(xì)胞的增殖26-27
• 2.2.6 Real-time PCR檢測不同純鈦試件表面RSC96細(xì)胞的神經(jīng)營養(yǎng)因子的基因表達(dá)相對量27-31
• 2.2.7 背根神經(jīng)元的提取、鑒定、培養(yǎng)31-33
• 2.2.8 背根神經(jīng)元在不同純鈦試件共培養(yǎng)的存活、粘附的掃描電鏡觀察33
• 2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理33-34
• 第3章 結(jié)果34-49
• 3.1 掃描電鏡下三種純鈦試件的表面形貌的特點(diǎn)34-38
• 3.1.1 M組表面形貌特點(diǎn)34-35
• 3.1.2 S組表面形貌特點(diǎn)35-36
• 3.1.3 E組表面形貌特點(diǎn)36-38
• 3.2 免疫熒光及SEM觀察三種純鈦試件表面RSC96細(xì)胞的粘附、伸展38-41
• 3.2.1 FITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽染色和DAPI染色38-39
• 3.2.2 SEM觀察39-41
• 3.3 MTT法檢測不同純鈦試件表面RSC96細(xì)胞的增殖41-42
• 3.4 Real-time PCR檢測不同純鈦試件表面RSC96細(xì)胞的神經(jīng)營養(yǎng)因子的基因表達(dá)相對量42-44
• 3.5 背根神經(jīng)元的鑒定44-45
• 3.6 SEM觀察不同純鈦試件表面背根神經(jīng)元的粘附45-49
• 第4章 討論49-53
• 4.1 純鈦表面與種植體周圍神經(jīng)再生49-52
• 4.2 種植體周圍神經(jīng)再生及骨感知的展望52-53
• 第5章 結(jié)論53-54
• 參考文獻(xiàn)54-61
• 導(dǎo)師簡介61-62
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果62-63
• 致謝63-64

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