目的 探討miR-204-5p對(duì)溴結(jié)構(gòu)域蛋白（BRD）4的靶向作用機(jī)制以及對(duì)舌鱗狀細(xì)胞癌SCC25細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響。方法 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR）檢測(cè)舌鱗狀細(xì)胞癌組織以及不同細(xì)胞株系間的miR-204-5p和BRD4 mRNA的表達(dá)水平;miR-204-5p轉(zhuǎn)染SCC25細(xì)胞后,細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK）8法檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖的影響,Transwell小室法檢測(cè)miR-204-5p對(duì)SCC25遷移和侵襲的影響;使用TargetScan和熒光素酶實(shí)驗(yàn)分析并驗(yàn)證miR-204-5p與BRD4的靶向調(diào)控關(guān)系;RT-qPCR和Western blot檢測(cè)miR-204-5p模擬物和抑制劑對(duì)BRD4表達(dá)水平的影響;Transwell小室法和CCK8法檢測(cè)miR-204-5p調(diào)控BRD4對(duì)SCC25增殖和遷移侵襲的影響。結(jié)果 miR-204-5p在舌鱗狀細(xì)胞癌組織和SCC25細(xì)胞中表達(dá)下調(diào),BRD4在舌鱗狀細(xì)胞癌組織和SCC25細(xì)胞中表達(dá)上調(diào);提高miR-204-5p表達(dá)量抑制SCC25細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲;TargetScan和熒光素酶實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-20... 

【文章來源】：華西口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2020,38(02)北大核心CSCD

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圖 1 RT-qPCR檢測(cè)miR-204-5p和BRD4表達(dá)水平的變化

圖 1 RT-qPCR檢測(cè)miR-204-5p和BRD4表達(dá)水平的變化TargetScan軟件在線分析發(fā)現(xiàn)BRD4和miR-204-5p存在結(jié)合位點(diǎn),見圖4A。與共轉(zhuǎn)染miR-NC和BRD4-WT組(0.85±0.06)相比,共轉(zhuǎn)染miR-204-5p和BRD4-WT組的細(xì)胞相對(duì)熒光活性(0.39±0.08)顯著降低(t=7.967,P=0.001),見圖4B。miR-NC、miR-204-5p、anti-miR-NC、anti-miR-204-5p組的BRD4 mRNA相對(duì)表達(dá)水平(圖4C)分別為1.00±0.05、0.34±0.04、0.94±0.07、1.66±0.11;蛋白相對(duì)表達(dá)水平(圖4D、E)分別為1.00±0.09、0.46±0.07、0.91±0.03、1.87±0.16。miR-204-5p模擬物促使BRD4的mRNA和蛋白均顯著下調(diào)表達(dá),miR-204-5p抑制劑促使BRD4的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(FmRNA=165.668,PmRNA=0.000;F蛋白=105.539,P蛋白=0.000)。

miR-204-5p、miR-204-5p+pcDNA、miR-204-5p+BRD4組發(fā)生遷移的SCC25細(xì)胞數(shù)量分別為70.24±7.18、68.25±6.81、99.36±11.04(F=12.418,P=0.007);發(fā)生侵襲的細(xì)胞數(shù)量分別為50.17±5.14、48.95±4.92、81.39±8.56(F=24.559,P=0.001)。與miR-204-5p和miR-204-5p+pcDNA組相比,miR-204-5p+BRD4組的SCC25細(xì)胞增殖能力顯著提升(P<0.05),見圖5。圖 4 熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]溴結(jié)構(gòu)域蛋白4在腫瘤中的研究進(jìn)展[J]. 仝營(yíng)營(yíng),丁文評(píng),張蓮,金星鏡,陳思宇.  癌癥進(jìn)展. 2015(01)



本文編號(hào)：3121420