目的探究機械激活性離子通道壓電蛋白Piezo1通過Notch信號通路介導人牙周膜干細胞（h PDLSC）成骨分化作用機制。方法選取自2016年1月1日—2018年1月1日就診于北京兒童醫(yī)院正畸科的8～14歲兒童因阻生而拔出的年輕恒牙的牙周膜組織為細胞來源,采用酶消化法對hPDLSC進行提取。采用免疫組織化學染色法檢測角蛋白、波形蛋白的表達和流式細胞術(shù)對hPDLSC的標志物CD146和STRO-1進行鑒定。構(gòu)建和篩選siRNA-Piezo1基因干擾載體和Piezo1基因過表達質(zhì)粒。應用Flexcell 4000T機械牽張應力儀器構(gòu)建體外牽張力學hPDLSC細胞模型。實驗分成5組:siRNA干擾組、過表達組、空白對照組、牽張應力組和陰性對照組。熒光定量聚合酶鏈反應（RT-qPCR）檢測Piezo1、Notch1和成骨基因堿性磷酸酶（ALP）、Runt相關(guān)基因2（Runx2）、骨鈣素（OCN）和骨涎蛋白（BSP）的表達。Western blot檢測成骨標志蛋白ALP和Runx2的表達。Fluo-3 AM探針檢測細胞內(nèi)鈣離子含量。結(jié)果 h PDLSC波形蛋白染色陽性,角蛋白染色陰性。流式細胞儀... 

【文章來源】：華西口腔醫(yī)學雜志. 2020,38(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

h PDLSC的鑒定免疫組織化學染色

si RNA干擾組、過表達組、空白對照組、牽張應力組和陰性對照組Piezo1 m RNA的表達水平差異有統(tǒng)計學意義（F=9.573,P<0.05）。過表達組、空白對照組Piezo1 m RNA表達水平明顯高于si RNA干擾組，差異有統(tǒng)計學意義（q=3.893,P<0.05;q=2.113,P<0.05）。牽張應力組Piezo1 m RNA表達水平明顯高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義（q=2.006,P<0.05），但是與陰性對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（q=0.208,P>0.05）（圖4A）。si RNA干擾組、過表達組、空白對照組、牽張應力組和陰性對照組Notch1 m RNA的表達水平差異有統(tǒng)計學意義（F=11.003,P<0.05）。過表達組、空白對照組Notch1 m RNA水平明顯高于si RNA干擾組，差異具有統(tǒng)計學意義（q=2.991,P<0.05;q=2.463,P<0.05）。牽張應力組Notch1 m RNA表達水平明顯高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義（q=2.331,P<0.05），但是與陰性對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（q=0.188,P>0.05）（圖4B）。成骨基因ALP、Runx2、OCN和BSP的表達也有同樣的趨勢（圖4C～F）。2.5 Western blot檢測成骨標志蛋白ALP和Runx2的表達

Western blot檢測ALP和Runx2的表達

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3118054