【目的】本研究通過對臨床上牙周炎患者與健康患者牙齦組織中炎癥細胞和自噬相關(guān)基因的表達的檢測,初步分析自噬與炎癥的相關(guān)性。然后構(gòu)建大鼠牙周炎模型,通過藥物抑制自噬,檢測是否可以通過調(diào)節(jié)炎癥激活的自噬來抑制炎癥細胞的浸潤以及牙槽骨的吸收,并在體外驗證自噬調(diào)節(jié)對于破骨細胞的影響,以期能進一步揭示自噬在牙周炎炎癥性骨吸收中的作用,為通過調(diào)控細胞自噬進行預防和治療牙周炎提供新的思路�！痉椒ā勘狙芯堪伺R床研究、體內(nèi)實驗和體外實驗。在臨床研究中,收集牙冠延長術(shù)中或開窗助萌術(shù)中切取的牙齦組織,作為健康牙齦組織;收集拔除無法保留重度牙周炎患牙時的牙齦組織,作為慢性牙周炎患者牙齦組織。再通過蘇木精伊紅染色、免疫組織化學染色等方法觀察牙齦組織中炎癥因子細胞以及自噬相關(guān)蛋白的表達情況。在體內(nèi)實驗中,我們通過建立大鼠牙周炎模型,同時進行牙齦局部注射自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤（3-MA）或氯喹（CQ）來進一步探究自噬在牙周炎炎癥發(fā)生發(fā)展和骨代謝環(huán)節(jié)中的作用。實驗動物隨機分為以下6組:1)正常組;2)牙周炎組;3)牙周炎+低濃度3-甲基腺嘌呤組;4)牙周炎+高濃度3-甲基腺嘌呤組;5)牙周炎+低濃度氯喹組;6)牙... 

【文章來源】：南京大學江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

自噬形成過程的分子機制在起始誘導階段，哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamycin,mTOR）作為重要的細胞內(nèi)營養(yǎng)和能量狀態(tài)感受體，參與調(diào)控自噬的發(fā)生[6]；在成

南京大學碩士學位論文182.3.2HE染色觀察牙齦組織形態(tài)組織病理學檢查（HE染色）結(jié)果顯示：正常（PH）組牙齦上皮釘突較短、結(jié)締組織內(nèi)可見少量炎癥細胞浸潤或無炎細胞浸潤；慢性牙周炎（CP）組上皮釘突明顯伸長、可呈網(wǎng)狀，且結(jié)締組織內(nèi)可見大量炎性細胞浸潤（圖2-1）。圖2-1健康（PH）組牙齦和慢性牙周炎組(CP)牙齦的組織病理學特點。（A）正常牙齦（100×）；（B）炎癥牙齦（100×）；（C）正常牙齦（400×）；（D）炎癥牙齦（400×）。2.3.3牙齦組織中巨噬細胞、淋巴細胞和漿細胞表達情況通過免疫組化染色的方法觀察了正常組和慢性牙周炎組牙齦組織中巨噬細胞和漿細胞的表達情況。CD68、CD19、CD138染色結(jié)果顯示，CP組CD68+細胞數(shù)明顯高于PH組，此外CP組CD19+細胞和CD138+細胞也明顯多于PH組，其差異具有統(tǒng)計意義（p<0.0001）（圖2-2）。

南京大學碩士學位論文29同上），同時使用探針將109CFU/mL的新鮮P.gingivalis菌液接種于絲線結(jié)扎的牙位處，并檢查絲線結(jié)扎情況以及大鼠牙周狀況，若有松脫則及時重新結(jié)扎；（4）取材：給藥21天后，全部組的大鼠給予過量麻藥進行安樂死。收集大鼠上頜雙側(cè)頜骨標本：右側(cè)上頜骨標本置于4%多聚甲醛中固定，用于后續(xù)的Micro-CT以及組織病理學檢測，左側(cè)的上頜骨標本用于收集實驗牙腭側(cè)牙齦組織。圖3-2大鼠牙周炎模型建立。3.2.6大鼠頜骨Micro-CT檢測與牙槽骨吸收情況測量將大鼠右側(cè)上頜骨浸泡在4%多聚甲醛中固定48小時后，用QuantumGXMicro-CT進行掃描，掃描參數(shù)為：掃描分辨率36μm，管電壓90Kv，管電流80μA，掃描方式360°旋轉(zhuǎn)，掃描時間14分鐘。使用Analyzed12.0軟件對掃描獲得的數(shù)據(jù)進行三維重建，獲得上頜第二磨牙腭側(cè)的三維數(shù)字化圖像。測量上頜第二磨牙釉牙骨質(zhì)界（cemento-enameljunction,CEJ）至牙槽嵴頂（alveolarbonecrest,ABC）間的線性距離作為評價牙槽骨吸收情況的方法[28]。根據(jù)斷層測量法[29,30]，分析之前在軟件中將獲得的每個樣本所有斷層圖像重新定向，以使掃描軸和解剖位置一致[31]。然后將上頜第二磨牙咬合面近遠中向長軸、咬合面、牙體長軸分別于軟件中的X、Y、Z軸相平行。測點某位點的CEJ-ABC時，使Z軸通過該位點，然后測量此處的距離。分別測量了腭側(cè)近中2個位點、腭側(cè)中間1個位點和腭側(cè)遠中2個位點，將5個位點的測量值的平均值作為該實驗牙的實驗數(shù)據(jù)。3.2.7組織病理學評估完成Micro-CT掃描后，取出已固定48小時的大鼠右側(cè)上頜骨，并對其進行修整，去除多余的部分。然后將標本放入10%EDTA脫鈣液中進行脫鈣，每3天更換一次脫鈣液，直到針能輕松地刺入骨組織并且無阻力感（此為脫鈣結(jié)點，一般需要2-3個月）?

【參考文獻】：
期刊論文
[1]兩種利用micro-CT測量小鼠牙周炎模型牙槽骨吸收的方法比較[J]. 崔迪,張楊珩,張婷,魏挺力,閆福華.  中國介入影像與治療學. 2017(03)



本文編號：3104097