逐步加快的社會生活節(jié)奏，越來越多的環(huán)境因素、社會心理因素導(dǎo)致了惡性腫瘤的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，惡性腫瘤的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，目前頜面部腫瘤術(shù)后所造成的組織缺損通常采取皮瓣移植的方法加以整復(fù)。切除后通過化學(xué)藥物治療或者是放射治療，這樣會引起皮瓣繼發(fā)性放射損害，遷延難愈，由此所導(dǎo)致的創(chuàng)區(qū)難愈及皮瓣壞死是一種典型的“放創(chuàng)復(fù)合傷”，在目前較難治療。瘦素（Leptin）作為一種創(chuàng)傷修復(fù)細(xì)胞因子，對于促進(jìn)創(chuàng)傷愈合，發(fā)揮著不可替代的作用。人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞（HPMSCs）可以在一定條件下分化成為多種組織細(xì)胞，它也能夠促進(jìn)創(chuàng)傷組織的修復(fù)。本實(shí)驗(yàn)擬將leptin基因轉(zhuǎn)入HPMSCs中，鑒定leptin基因在HPMSCs中的表達(dá)，為后續(xù)的轉(zhuǎn)基因干細(xì)胞治療放創(chuàng)復(fù)合傷奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)在無菌條件下剝除胎盤羊膜,然后取羊膜面胎盤組織,用PBS沖洗干凈后用眼科剪剪成碎片,用膠原酶II消化，并用人淋巴細(xì)胞分離液除去部分雜細(xì)胞，得到的單個(gè)核細(xì)胞傳代培養(yǎng)至第3代；分別根據(jù)瘦素基因的序列，并結(jié)合pIRES2-EGFP載體和pMD18-T-simple上的多克隆位點(diǎn)，在基因兩端設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)，在瘦素基因5＇端引入NheI酶... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

leptin基因片段PCR產(chǎn)物的凝膠電泳鑒定

11圖2.2 leptin基因測序圖譜2） 重組質(zhì)粒酶切鑒定重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-LEP構(gòu)建后，以空載體作為對照組，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分別可見大小為5.7kb、5.3kb左右的兩條帶（圖2.3）；前者為重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-LEP，后者為空載體pIRES2-EGFP，而雙酶切后凝膠電泳檢測，則可

組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-LEP構(gòu)建成功。M：1kb DNA Ladder Marker；1：重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-LEP；2：pIRES2-EGFP圖2.3 重組質(zhì)粒的凝膠電泳鑒定M：DNA Marker Ⅲ； 1：酶切產(chǎn)物圖 2.4 重組質(zhì)粒 pIRES2-EGFP-LEP 的酶切鑒定3） 真核表達(dá)載體示意圖（圖2.5）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3089592