研究背景牽張成骨作為一項(xiàng)熱門的內(nèi)源性骨組織工程學(xué),其生物學(xué)機(jī)制仍未被研究清楚。骨髓間充質(zhì)細(xì)胞在牽張成骨過程中起著重要作用,是對應(yīng)力最為敏感的應(yīng)答細(xì)胞之一。目前尚未有骨膜蛋白在牽張成骨分化過程中表達(dá)及作用的研究報(bào)道。本研究擬分離并培養(yǎng)出小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞,應(yīng)用多單元細(xì)胞拉伸裝置對其施加動(dòng)態(tài)、大小不同的長軸形變量來刺激誘導(dǎo)成骨分化,檢測該過程中成骨信號及骨膜蛋白的表達(dá)水平,并進(jìn)一步給與外源性骨膜蛋白干預(yù),探討骨膜蛋白在小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞牽張成骨分化過程中的作用。材料與方法1.小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定利用密度梯度離心法分離并培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞,并根據(jù)細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞分化后產(chǎn)生礦化結(jié)節(jié)及Ⅱ型膠原等對小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞分化能力進(jìn)行鑒定。2.骨膜蛋白在小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的牽張成骨分化過程中的表達(dá)應(yīng)用多單元細(xì)胞拉伸裝置,檢測在5%（A組）、10%（B組）、15%（C組）形變量的動(dòng)態(tài)牽張力作用下,小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞中成骨信號及骨膜蛋白的表達(dá)水平。3.骨膜蛋白在小鼠骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的牽張成骨分化過程中的作用應(yīng)用多單元細(xì)胞拉伸裝置,使用15%形變量的牽張力,在0g/L（A組）、10g/L（B... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－３?ＩＩ型膠原（ｘ４００）??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｙｐｅ?ＩＩ?ｃｏｌｌａｇｅｎ?（＞＜４００）??

?頌士學(xué)位論文???一?ｎ?■，??老．？十？矯??圖１－２礦化結(jié)節(jié)（茜素紅Ｘ２００）??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄ?ｎｏｄｕｌｅｓ?（Ａｌｉｚａｒｉｎ?ｒｅｄｘ２００）??魏轟＿?▲、??Ｍ?＇＇?Ｊ?ｉｋ??圖１－３?ＩＩ型膠原（ｘ４００）??Ｆｉｇ．?１－３?Ｔｙｐｅ?ＩＩ?ｃｏｌｌａｇｅｎ?（＞＜４００）??３．討論??骨髓間充質(zhì)細(xì)胞在骨形成中扮演著重要角色，是牽張成骨中Ｍ重要感受牽??張力刺激和成骨分化的細(xì)胞，由十典優(yōu)良的成骨潛力和豐富的來源，一直是研??宄的焦點(diǎn)，是－種理想的組織工程的種ｆ？細(xì)胞１５１－５（）｜。臨床上經(jīng)常取小鼠的的肢體??長背的付髓來分離并培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)細(xì)胞，但由于小鼠中可獲得的骨髓量較少，??１５??

?頌士學(xué)位論文???１．２方法??１．２．１細(xì)胞加力??①在超凈工作臺上，將特制的硅膠膜在高溫、高壓滅菌消毒后自然晾干，??予以１．５?１１１丨（０．０１２｜＾／１１１１）的１型鼠尾膠在硅膠膜上涂抹均勻，待膠干后，將硅??膠膜組裝到多單元細(xì)胞拉伸裝置的細(xì)胞培養(yǎng)單元上，同時(shí)在硅膠膜上放置內(nèi)環(huán)??長４０ｍｍ、寬３０ｍｍ的硅膠膜矩形環(huán)以控制細(xì)胞接種的范圍在矩形環(huán)內(nèi)。??②將細(xì)胞培養(yǎng)單元在３７°Ｃ體積分?jǐn)?shù)５％Ｃ〇２培養(yǎng)箱培養(yǎng)２４ｈ后取出硅膠膜??矩形環(huán)，補(bǔ)加含體積分?jǐn)?shù)１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培養(yǎng)基１０ｍＬ。??③在細(xì)胞加力前在倒置顯微鏡觀察小鼠ＢＭＳＣｓ細(xì)胞在硅膠膜上的生長及??貼附情況，并收集樣本進(jìn)行檢測。??１????－—Ｂｉｌｌ??ｆｅ；爛：、－二ｉ??Ｕｓ�。�??圖２－１多通道單軸細(xì)胞牽拉裝置??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｍｕｌｔｉｃｈａｎｎｅｌ?ｕｎｉａｘｉａｌ?ｃｅｌｌ?ｔｒａｃｔｉｏｎ?ｄｅｖｉｃｅ??④將細(xì)胞培養(yǎng)單元分為Ａ組，Ｂ組，Ｃ組，將細(xì)胞培養(yǎng)單元安裝于多單元??細(xì)胞拉伸裝置，通過多通道細(xì)胞牽拉裝置（圖２－１）的培養(yǎng)箱中信次施加５％?（Ａ??１９??

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3065240