發(fā)布時間：2021-03-02 17:42

　　目的:制備人牙周韌帶細(xì)胞（periodontal ligament cells,PDLCs）、牙髓細(xì)胞（dental pulp cells,DPCs）、牙齦成纖維細(xì)胞（gingival fibroblasts,GFs）來源的脫細(xì)胞基質(zhì)（decellularized matrix,DCM）,檢測其對人牙周韌帶干細(xì)胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）增殖、分化的影響。方法:采用表面活性劑聯(lián)合DNA酶制備PDLCs、DPCs和GFs來源的脫細(xì)胞基質(zhì)。將同種異體的PDLSCs接種于脫細(xì)胞基質(zhì),Pico Green試劑盒檢測其對PDLSCs增殖能力的影響,定量實時熒光聚合酶鏈應(yīng)（quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR）檢測PDLSCs成骨、成牙骨質(zhì)和成牙周韌帶相關(guān)基因的表達(dá),包括堿性磷酸酶（ALP）、Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（RUNX2）、骨鈣素（OCN）、牙骨質(zhì)蛋白1（CEMP1）、骨膜素（POSTN）和I型膠原α1（COL1A1）。結(jié)果:通過表面活性劑聯(lián)合DNA酶獲得的PD... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

倒置光學(xué)顯微鏡觀察PDLCs、DPCs和GFs的原代培養(yǎng)情況：（A）少量PDLCs從組織塊邊緣爬出；（B）大量DPCs生長并以組織塊為中心呈放射狀排列；（C）組織塊周圍見GFs爬出，呈渦旋狀生長

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文第一部分結(jié)果21圖2倒置相差顯微鏡觀察第4代PDLCs、DPCs和GFs的形態(tài)：（A）PDLCs形態(tài)為長梭形或星形，有2～3個胞質(zhì)突起，胞核圓形或橢圓形，核仁清晰；（B）DPCs呈梭形或多角形，胞質(zhì)突起較PDLCs和GFs短；（C）GFs為長梭形，胞質(zhì)突起較細(xì)長。2.2PDLSCs的克隆分離鑒定2.2.1形態(tài)學(xué)觀察采用有限稀法成功獲取PDLSCs，采用倒置光學(xué)顯微鏡和倒置相差顯微鏡觀察第2代PDLSCs，細(xì)胞呈長梭形，胞核呈圓形或卵圓形、位于胞體中央，核仁清晰（圖3A、B）。圖3第2代PDLSCs的形態(tài)學(xué)觀察：倒置光學(xué)顯微鏡（A）和倒置相差顯微鏡（B）見細(xì)胞呈長梭形，胞核呈圓形或卵圓形、位于胞體中央，核仁清晰。2.2.2CCK-8法增殖實驗結(jié)果采用CCK-8試劑盒檢測第3代PDLSCs的增殖情況，并繪制細(xì)胞增殖曲線（圖4）。PDLSCs增殖活力較強，接種后第3天即進(jìn)入細(xì)胞增殖旺盛期，從第10天開始增殖速度減緩，之后進(jìn)入平臺期。

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文第一部分結(jié)果22圖4第3代PDLSCs的細(xì)胞增殖曲線（橫軸為細(xì)胞培養(yǎng)天數(shù)，縱軸為OD值）：PDLSCs接種后第3天即進(jìn)入細(xì)胞增殖旺盛期，從第10天開始增殖速度減緩，之后進(jìn)入平臺期。2.2.3流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果流式細(xì)胞儀檢測第3代PDLSCs表面分子的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，PDLSCs表面陽性表達(dá)CD105、CD146，其表達(dá)率分別為85.02％、96.88%（圖5A、B），而幾乎不表達(dá)CD45（0.05%）（圖5C）。圖5第3代PDLSCs表面分子的表達(dá)情況：PDLSCs表面陽性表達(dá)CD105（85.02％）和CD146（96.88%），但幾乎不表達(dá)CD45（0.05%）。2.2.4克隆形成實驗結(jié)果將第3代PDLSCs以低密度接種后細(xì)胞呈集落樣生長，培養(yǎng)14天后用0.1%結(jié)晶紫溶液染色，染色結(jié)果顯示，PDLSCs的克隆形成率為68.67%（圖6）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新型膠原基質(zhì)與游離齦移植術(shù)增寬種植區(qū)域角化組織效果的短期臨床觀察[J]. 王琪,孟煥新,宋文莉,李文靜,石姝雯,侯建霞,韓劼.  中華口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2019 (02)



本文編號：3059668