牙成釉細(xì)胞不僅可以分泌釉基質(zhì)形成牙釉質(zhì),而且參與調(diào)控成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化和分泌基質(zhì),在牙齒發(fā)育中發(fā)揮著重要的作用。環(huán)境因素、營(yíng)養(yǎng)障礙、外傷、炎癥以及遺傳缺陷等可造成牙成釉細(xì)胞的分化異常,其表現(xiàn)形式多種多樣,如氟牙癥、四環(huán)素牙、釉質(zhì)發(fā)育不全、牙本質(zhì)形成不全等。進(jìn)行成釉細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)研究對(duì)于揭示成釉細(xì)胞的分化、牙釉質(zhì)的形成和對(duì)成牙本質(zhì)細(xì)胞調(diào)控的分子機(jī)制具有重要意義,對(duì)牙齒組織工程研究具有重要的理論指導(dǎo)意義。成釉細(xì)胞為終末分化細(xì)胞,在牙冠發(fā)育形成后逐漸退化為縮余釉上皮,牙齒萌出后自然脫落,因而成釉細(xì)胞的獲得和體外培養(yǎng)難度較大。迄今為止,牙成釉細(xì)胞的細(xì)胞生物學(xué)及分子調(diào)控機(jī)制的研究成果皆建立在大家所熟悉的方便、廉價(jià)的二維細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)上。雖然體外分離培養(yǎng)成釉細(xì)胞的方法較多,但均存在一定的缺陷。另外,二維培養(yǎng)條件下細(xì)胞的基因表達(dá)和生物學(xué)特性發(fā)生了變化,導(dǎo)致細(xì)胞去分化、部分蛋白的表達(dá)喪失、蛋白合成能力下降。如何獲得更接近于體內(nèi)細(xì)胞生長(zhǎng)微環(huán)境、保持細(xì)胞生物學(xué)特性的體外細(xì)胞培養(yǎng)方法是急需解決的問題。三維立體培養(yǎng)系統(tǒng)不僅可提供接近于體內(nèi)的培養(yǎng)微環(huán)境,還可以高通量地研究特定基因改變與細(xì)胞表型的關(guān)系及其生物... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：118 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

大鼠第一磨牙牙胚HE染色a.出生后1天大鼠第一磨牙牙胚b.出生后2天大鼠第一磨牙牙胚c.出生后3天

第四軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文本實(shí)驗(yàn)成功分離獲得了第一磨牙牙胚（圖2a），并進(jìn)一步將其分離為釉器和牙乳頭兩部分(圖2b)。經(jīng)胰蛋白酶消化法，將成釉器消化為單，一般可收獲1x105個(gè)細(xì)胞/個(gè)牙胚。差速貼壁1小時(shí)，可去除大部分細(xì)胞。經(jīng)體外培養(yǎng)7日后，相差顯微鏡觀察可見，細(xì)胞為多角形，呈石狀生長(zhǎng)。細(xì)胞核明顯，細(xì)胞間為緊密連接，成片生長(zhǎng)，（圖2c、2d生后第5、6天的大鼠成釉器細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)6天后，細(xì)胞出現(xiàn)死亡見大量漂浮的死細(xì)胞且細(xì)胞數(shù)量少。相比之下，第3、4天的大鼠成釉胞則表現(xiàn)得非常健康，第4天成釉器增殖能力較強(qiáng)，細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)高三天組。而第1、2天大鼠成釉器細(xì)胞較少，收獲細(xì)胞數(shù)量少，約為0.5x/mL，上皮細(xì)胞呈鋪路石樣生長(zhǎng)特性不典型，混雜大量多角形、散在分胞。

圖4牙成釉器細(xì)胞的傳代培養(yǎng)（Bar=100μm）a. P1代牙成釉細(xì)胞細(xì)胞b. P2代牙成釉細(xì)胞細(xì)胞3.5 細(xì)胞免疫組織化免疫組化結(jié)果顯示，所培養(yǎng)細(xì)胞為上皮細(xì)胞標(biāo)志性蛋白CK14陽性（圖5.a），間充質(zhì)來源細(xì)胞標(biāo)志性蛋白vimentin染色陰性(圖5.b)�？瞻讓�(duì)照組顯示CK14免疫組化染色陰性(圖5.c)。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3051986