目的:探討機(jī)械張應(yīng)力作用下大鼠顱骨縫間充質(zhì)干細(xì)胞早期成骨分化中ROCK-TAZ信號軸的調(diào)控作用。方法:提取大鼠顱骨縫間充質(zhì)干細(xì)胞并通過流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面標(biāo)記物。培養(yǎng)大鼠顱骨縫間充質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行成骨成脂誘導(dǎo)分化,使用茜素紅、油紅O染色及Real-time PCR檢測其成骨成脂分化能力。通過Flexcell-5000應(yīng)力加載系統(tǒng)對大鼠顱骨縫間充質(zhì)干細(xì)胞施加5%,0.5HZ,2h/天的張應(yīng)力刺激,使用鬼筆環(huán)肽骨架染色觀察細(xì)胞形態(tài),以及通過細(xì)胞計數(shù)檢測細(xì)胞增殖能力,通過Real-time PCR及WesternBlot檢測成骨相關(guān)指標(biāo)OPN、Runx2表達(dá)情況。對細(xì)胞不同時間點連續(xù)加力,通過Real-time PCR及WesternBlot檢測ROCK以及胞核蛋白TAZ表達(dá)情況,使用ROCK抑制劑Y27632抑制ROCK活性后,觀察張應(yīng)力對間充質(zhì)干細(xì)胞成骨能力以及胞核蛋白TAZ的影響。通過雙熒光素酶報告基因驗證大鼠TAZ基因與Runx2存在結(jié)合位點,同時構(gòu)建TAZ慢病毒載體下調(diào)TAZ表達(dá),觀察張應(yīng)力作用下Runx2表達(dá)的變化。結(jié)果:細(xì)胞流式及成骨成脂誘導(dǎo)結(jié)果顯示大鼠顱骨縫間充質(zhì)干細(xì)胞具有干... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 大鼠顱骨縫間充質(zhì)干細(xì)胞分離與鑒定
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 討論
第二部分 張應(yīng)力作用對大鼠顱骨縫間充質(zhì)干細(xì)胞早期增殖分化的影響
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 討論
第三部分 張應(yīng)力作用下ROCK-TAZ信號軸對大鼠顱骨縫間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的調(diào)控作用
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄：臨床病例展示
論文發(fā)表情況
致謝



本文編號：3040463