齲病是一種細(xì)菌感染性疾病,其中變異鏈球菌族細(xì)菌是其主要病原菌。主要包括變異鏈球菌（S.mutans）和遠(yuǎn)緣鏈球（S.sobrinus,又稱茸毛鏈球菌、表兄鏈球菌）。粘附是變異鏈球菌族細(xì)菌致齲的基礎(chǔ),變異鏈球菌表面蛋白（surface protein antigen, SpaP）和葡聚糖結(jié)合蛋白（glucan-binding proteins, Gbp）是變異鏈球菌重要的粘附毒力因子,參與介導(dǎo)細(xì)菌在牙面的粘附,并具有良好的免疫原性,能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生保護性免疫應(yīng)答。本實驗擬將變異鏈球菌表面蛋白SpaP的P區(qū)和葡聚糖結(jié)合蛋白Gbp的編碼基因spap-P和gbd嵌合到真核表達載體pVAX1中,構(gòu)建真核重組質(zhì)粒pVAX1-SPG。并將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞觀察目的蛋白的表達,為進一步的動物實驗研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)。方法：本研究共分為兩個實驗實驗一重組真核表達質(zhì)粒pVAX1-SPG的構(gòu)建以變異鏈球菌基因組DNA為模板,PCR擴增變異鏈球菌表面蛋白P區(qū)編碼基因spap-P和葡聚糖結(jié)合蛋白GbpA的GBD編碼基因gbd,分別將目的基因spap-P和曲d定向克隆到真核載體pVAX1中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pVAX... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

變異鏈球菌基囚織DN廣、

將重組質(zhì)粒pVAxl一SPG送寶生物(大連)有限公司，使用引物T7、BGHrev對重組質(zhì)粒進行測序驗證。2.結(jié)果2.1細(xì)菌DNA的鑒定變異鏈球菌國際標(biāo)準(zhǔn)株UA159經(jīng)鏡檢無異常，無污染，基因組DNA抽提產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠電泳均為單一條帶，約23kb，證實其完整，無降解。OD26O/OD28O比值均在1.6一1.8之間，說明抽提產(chǎn)物無蛋白質(zhì)、無酚污染，無洲A污染。濃度在550一850林g單l(圖l)。

圖4pVAxl一SP酶切產(chǎn)物Fig.4RestrictionendonueleaseofPVAXI一SPl:DL2000Marker2:pVAxl一SP雙酶切產(chǎn)物3:人一Hind111Marker圖5pVAxl一GG酶切產(chǎn)物Fig.5RestrietionendonueleaseofPVAXI一GGl:入一Hind111Marker2:pVAxl一GG雙酶切產(chǎn)物3:DL2000Marker一231子O卜p，一961一655些;1〕l戶月王平母一4361bP啥’一23221，一202了b1斗略1甲.ZOCIC.卜p一‘.1OC叫二bp一‘下50bp一SOClbp一一564bp“

【參考文獻】：
期刊論文
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[6]脂質(zhì)體介導(dǎo)哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)染的改良方法[J]. 尹曉光,吳秀麗,萬敏,王艷媚,王麗穎,于永利.  中國免疫學(xué)雜志. 2007(03)
[7]尋找基因轉(zhuǎn)染人脂肪來源的成體干細(xì)胞合適載體:脂質(zhì)體介導(dǎo)質(zhì)粒pEGFP-N1、重組腺病毒Ad5-EGFP與重組腺相關(guān)病毒rAAV-2/1-EGFP[J]. 靳小兵,孫永生,婁思權(quán),張克.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2007(07)
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博士論文
[1]致齲鏈球菌粘附、增殖相關(guān)基因的克隆、原核表達及功能初步研究[D]. 蘇凌云.第四軍醫(yī)大學(xué) 2002



本文編號：2979718