發(fā)布時(shí)間：2021-01-09 18:29

　　口腔腫瘤中最常見的惡性腫瘤是口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinoma, OSCC）。目前,手術(shù)切除仍是主要的治療方式。但大多數(shù)患者是在晚期才被診斷,且預(yù)后較差。其主要原因在于口腔鱗狀細(xì)胞癌容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移�？谇击[狀細(xì)胞癌在發(fā)生轉(zhuǎn)移與其具有快速增殖的能力有著密切的關(guān)系。因此,有效地抑制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖是治療口腔鱗癌的關(guān)鍵。有絲分裂過程中,染色體分裂異常是產(chǎn)生遺傳不穩(wěn)定性繼而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和進(jìn)展的重要原因。紡錘體和動粒關(guān)聯(lián)蛋白（Spindle and Kinetochroe Associated complex SKA）,在有絲分裂中期使紡錘體微管穩(wěn)定地附著在動粒（kinetochore, KT）上,從而確保有絲分裂的順利完成。SKA蛋白復(fù)合體包含SKA1、SKA2和SKA3三個(gè)亞基。已有研究表明,SKA2與SKA3均與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān),然而,關(guān)于SKA1在腫瘤惡性進(jìn)展中的調(diào)節(jié)功能尚無報(bào)道。本文旨在研究SKA1是否是調(diào)節(jié)口腔鱗癌的惡性增殖的一個(gè)關(guān)鍵分子。本課題首先收集并采用免疫組化方法研究了SKA1基因在36例口腔鱗癌組織中和31例非腫瘤組織或癌旁組織中的表... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 口腔癌組織中SKA1的表達(dá)及其臨床意義
    1. 前言
    2. 材料與方法
        2.1 患者來源及臨床資料
        2.2 材料和試劑
        2.3 主要儀器
        2.4 試劑配置
        2.5 實(shí)驗(yàn)方法
            2.5.1 標(biāo)本處理
            2.5.2 免疫組化染色
            2.5.3 免疫組化結(jié)果判斷
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
    4 討論
第二部分 攜帶SKA1基因短發(fā)夾RNA慢病毒載體的構(gòu)建及其對靶基因的沉默的研究
    1. 前言
    2. 材料與方法
        2.1 質(zhì)粒、菌株和包裝細(xì)胞、
        2.2 材料和試劑
        2.3 主要儀器和耗材
        2.4 溶液配制
        2.5 方法
            2.5.1 SKA1-LOF質(zhì)粒載體的構(gòu)建
            2.5.2 SKA1-GOF慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定
            2.5.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.5.4 Western blot篩選可有效干擾目的基因表達(dá)的慢病毒質(zhì)粒
            2.5.5 慢病毒的包裝
            2.5.6 滴度測定
    3 結(jié)果
        3.1 SKA1 shRNA慢病毒載體鑒定
            3.1.1 pFH-L載體的雙酶切
            3.1.2 PCR法鑒定SKA1-LOF慢病毒載體
            3.1.3 SKA1-LOF慢病毒載體的測序鑒定
        3.2 SKA1-GOF載體的測序鑒定
            3.2.1 PCR產(chǎn)物的酶切鑒定
            3.2.2 陽性克隆的PCR鑒定
        3.3 Western blot驗(yàn)證靶點(diǎn)
        3.4 shRNA-SKA1的包裝及滴度測定
    4 討論
第三部分 慢病毒介導(dǎo)RNA干擾口腔鱗癌細(xì)胞SKA1基因?qū)?xì)胞惡性增殖和周期進(jìn)展的影響
    1. 前言
    2. 材料與方法
        2.1 細(xì)胞株
        2.2 材料和試劑
        2.3 主要儀器
        2.4 試劑配置
        2.5 實(shí)驗(yàn)方法
            2.5.1 慢病毒感染
            2.5.2 Western blot
            2.5.3 MTT法測量生長曲線
            2.5.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)
            2.5.5 流式細(xì)胞儀（FACS）檢測細(xì)胞周期
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 慢病毒感染效率鑒定
        3.2 SKA1基因的沉默效率驗(yàn)證
        3.4 SKA1沉默對口腔鱗癌細(xì)胞增殖的影響
        3.5 SKA1沉默對口腔鱗癌細(xì)胞體外克隆形成能力的影響
        3.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期
    4 討論
第四部分 表達(dá)譜芯片研究SKA1調(diào)節(jié)口腔鱗癌細(xì)胞的惡性增殖的分子機(jī)制
    1. 前言
    2. 材料與方法
        2.1 細(xì)胞株
        2.2 材料和試劑
        2.3 主要儀器
        2.4 試劑配置
        2.5 實(shí)驗(yàn)方法
            2.5.1 慢病毒感染
            2.5.2 總RNA的抽提
            2.5.3 cDNA探針制備
            2.5.4 芯片雜交
            2.5.5 qPCR驗(yàn)證差異表達(dá)基因
    3 結(jié)果
        3.1 基因芯片結(jié)果
            3.1.1 RNA樣品質(zhì)控信息
            3.1.2 基因功能聚類（Gene Ontology,GO）分析
        3.2 qPCR驗(yàn)證結(jié)果
    4 討論
參考文獻(xiàn)
結(jié)論
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：2967176