多種口腔疾患臨床治療需要骨組織修復(fù)與重建�，F(xiàn)有條件下,骨組織修復(fù)與重建是一個(gè)漫長(zhǎng)的過(guò)程,亟待新方法的出現(xiàn)促進(jìn)骨組織修復(fù)與重建。 運(yùn)用電刺激進(jìn)行骨的相關(guān)治療已有多年歷史,納秒脈沖電場(chǎng)(nanosecond pulsed electric fields, nsPEFs )作為一種高場(chǎng)強(qiáng)短脈寬電脈沖,其生物學(xué)效應(yīng)不同于一般電刺激。因此,研究nsPEFs作用于成骨細(xì)胞的生物學(xué)效應(yīng)是一個(gè)重要的方向。 目前,對(duì)nsPEFs細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)的研究已發(fā)現(xiàn)nsPEFs存在“窗口效應(yīng)”,而對(duì)于“窗口效應(yīng)”具體范圍尚無(wú)報(bào)道。 本實(shí)驗(yàn)主要利用10-100ns脈寬,5-15kv/cm場(chǎng)強(qiáng)的電場(chǎng)刺激體外培養(yǎng)的成骨樣細(xì)胞MG-63,采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法探討nsPEFs的“窗口效應(yīng)”,選擇最優(yōu)參數(shù)組合,通過(guò)MTT,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)FAS抗原表達(dá),吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)染色等方法,從多個(gè)層面,研究nsPEFs刺激對(duì)成骨樣細(xì)胞MG-63細(xì)胞存活率和形態(tài)的變化。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出以下結(jié)論: 1 10-100ns,5-15kv/cm脈沖電場(chǎng)對(duì)成骨樣細(xì)胞MG-63存在“窗口效應(yīng)”,其生物學(xué)效應(yīng)為細(xì)胞的早期凋亡。 2利用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法,對(duì)結(jié)果按照直觀分析法進(jìn)行分析,nsPEFs參數(shù)組合50ns,5kv,50Hz誘導(dǎo)早期細(xì)胞凋亡最少;nsPEFs的各參數(shù)的主次關(guān)系,脈寬場(chǎng)強(qiáng)頻率。因此,50ns,5kv,50Hz為10-100ns脈沖寬度,5-15kv/cm場(chǎng)強(qiáng)的最優(yōu)參數(shù)組合,可以此作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)參數(shù)選擇和設(shè)計(jì)的依據(jù)。 3經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)比,成骨樣細(xì)胞株MG-63的細(xì)胞存活率具有顯著的差異(p0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖曲線呈“V”型,4h時(shí)細(xì)胞增殖活性最低。4H后各時(shí)間點(diǎn)兩兩比較,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),增殖活性開(kāi)始升高。 4結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組FAS的表達(dá)明顯升高,存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。4h-24h之間兩兩比較實(shí)驗(yàn)組Fas表達(dá)不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。24h后,Fas表達(dá)降低。 5對(duì)比正常細(xì)胞形態(tài),nsPEFs刺激后細(xì)胞體積減小,形狀不規(guī)則,細(xì)胞核固縮或消失.
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

5%甘油），吹成細(xì)胞懸浮液，吸入無(wú)菌凍存管，封口膠封口，分階段依次從 4℃到-196℃緩慢放入液氮罐中長(zhǎng)期保存。細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)采用快速?gòu)?fù)蘇法，將凍存管取出后立即置 37℃恒溫水浴中振蕩，速液體融化，快速接種培養(yǎng)瓶中;隔天以含 10％小牛血清的 D/F-12 培養(yǎng)基清洗三，按照 5×105/瓶接種于 100ml 培養(yǎng)瓶中，并置于 CO2 孵箱（37℃、5％CO2、5％空氣）中繼續(xù)培養(yǎng)。1.5 電極池的設(shè)計(jì)根據(jù)實(shí)驗(yàn)中電場(chǎng)場(chǎng)強(qiáng)的需求，自制本實(shí)驗(yàn)所需要的電極池，如圖 3.1所示，該電極池為長(zhǎng)方形，其中，底板由蓋玻片制成，兩端為玻璃，不具有電傳導(dǎo)性；兩側(cè)是鉑金片，為導(dǎo)電材料，其旁邊設(shè)有加力電極。電極池的長(zhǎng) 2cm×寬 2cm×高 1cm ，其電極池細(xì)胞液容量是 2ml，場(chǎng)強(qiáng)是5-15kv/cm。

圖 1.3.1 實(shí)驗(yàn)波形Figur1.3.1experiment wave測(cè)方法 法檢測(cè)細(xì)胞活性驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞，稀釋至 1×104/ml,按 200μl/孔接種于組，檢測(cè)細(xì)胞設(shè) 3 個(gè)平行孔，共接種 5 塊 96 孔板，置于 C中。分別于納秒脈沖電場(chǎng)處理完成后 0h,4h,8h,24h.48h 各加入 MTT20μl（濃度為 5mg/ml）,置于 CO2 孵箱（37oC,596 孔板吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，150μl/孔加入二甲基亞砜（DMSin,結(jié)晶物充分溶解后，在酶標(biāo)儀 570nm 處檢測(cè)各孔的吸光細(xì)胞存活率：實(shí)驗(yàn)孔 OD 值-空白對(duì)照孔 OD 值活率(%)=×100%
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本文編號(hào)：2892333