低氧誘導(dǎo)因子HIF-1α是與腫瘤生長(zhǎng)進(jìn)程密切相關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,其表達(dá)水平對(duì)惡性腫瘤放化療敏感性及預(yù)后有顯著影響。本研究擬通過免疫組化及腫瘤放射生物學(xué)方法了解HIF-1α在人涎腺惡性腫瘤中的表達(dá)狀況及人涎腺惡性腫瘤細(xì)胞體外放射敏感性,并在此基礎(chǔ)上,應(yīng)用反義基因治療手段反義阻斷HIF-1α表達(dá),研究主動(dòng)下調(diào)HIF-1α表達(dá)水平對(duì)涎腺惡性腫瘤細(xì)胞放射敏感性的影響。探索基因治療與放射治療有機(jī)結(jié)合的方法,為提高涎腺惡性腫瘤局部控制率提供新的治療手段。 本研究采用~(192)Ir γ射線后裝照射的方式對(duì)體外培養(yǎng)的人粘液表皮樣癌細(xì)胞MC-1和人腺樣囊性癌細(xì)胞ACC-2實(shí)施照射,觀測(cè)腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的改變,并應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同劑量組的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù),繪制放射生物學(xué)曲線,測(cè)定主要放射生物學(xué)參數(shù),結(jié)果顯示常氧狀態(tài)下體外培養(yǎng)的MC-1和ACC-2細(xì)胞對(duì)~(192)Ir γ射線的放射敏感性并不高,SF_2值分別為0.879和0.987。 本課題結(jié)合臨床資料,采用LsAB法對(duì)23例腺樣囊性癌和20例粘液表皮樣癌腫瘤標(biāo)本進(jìn)行HIF-1α及CD34免疫組化染色,發(fā)現(xiàn)腺樣囊性癌及粘液表皮樣癌中HIF-1α高表達(dá)的比例分別為16/23和9/20(69.6%和45%),HIF-1α表達(dá)水平與腫瘤臨床分期及分化程度無顯著性關(guān)系,而與腫瘤微血管密度的大小有關(guān)。 在以上研究基礎(chǔ)上,我們通過基因治療手段,在常氧狀態(tài)下,應(yīng)用脂質(zhì)體介導(dǎo)的反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染技術(shù),反義阻斷MC-1和ACC-2細(xì)胞HIF-1αmRNA的表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)及MTT法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞放射生物學(xué)反應(yīng)的改變。結(jié)果表明常氧狀態(tài)下反義HIF-1α寡核苷酸轉(zhuǎn)染能夠顯著增加MC-1和ACC-2細(xì)胞放射誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡比率,并提高其放射敏感性(SF_2值分別降至0.63和0.84)。
【學(xué)位單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R739.8
【部分圖文】：

對(duì)照組ACC一2細(xì)胞透射電鏡下觀察情況與MC一1細(xì)胞相似，但部分細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量糖原顆粒。照射組細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化主要是染色質(zhì)邊集、核固縮、空泡樣變、髓樣變性等。如圖1一13、14、15。圖1一3.對(duì)照組MC一1細(xì)胞培養(yǎng)5日后光鏡下觀(xZOO)細(xì)胞排列緊密，生長(zhǎng)活躍。

圖1一4.ZGy照射組Mc一1細(xì)胞照射后5日光鏡下觀，(x200)見部分細(xì)胞體積脹大，空泡樣變。個(gè)別細(xì)胞見胞核裂解，胞膜消失。圖1一5.SGy照射組MC一1細(xì)胞照射后3日光鏡下觀(X3OO)，見多數(shù)細(xì)胞體積腫脹，胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡樣變(如箭頭示)，部分細(xì)胞胞核碎裂，胞膜破裂，胞質(zhì)外溢融合。

二嚴(yán))’1大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文圖1一4.ZGy照射組Mc一1細(xì)胞照射后5日光鏡下觀，(x200)見部分細(xì)胞體積脹大，空泡樣變。個(gè)別細(xì)胞見胞核裂解，胞膜消失。圖1一5.SGy照射組MC一1細(xì)胞照射后3日光鏡下觀(X3OO)，見多數(shù)細(xì)胞體積腫脹，胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡樣變(如箭頭示)，部分細(xì)胞胞核碎裂，胞膜破裂，胞質(zhì)外溢融合。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2886952