目的:通過兔后外側(cè)關(guān)節(jié)盤穿孔法探討建立顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型的可行性,在此基礎(chǔ)上應(yīng)用Micor-CT定量分析軟骨下骨骨質(zhì)改建情況及變化趨勢,利用免疫組織化學(xué)染色方法檢測在顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎不同時(shí)期Sox9、MMP-13和VEGF在髁突軟骨及軟骨下骨中的表達(dá)情況并闡述它們對軟骨下骨骨質(zhì)改建和骨關(guān)節(jié)炎發(fā)展的作用機(jī)制。方法:5月齡健康的新西蘭純種白兔24只,隨機(jī)分為2組,分別為實(shí)驗(yàn)組和假手術(shù)組,各12只;手術(shù)組在兔關(guān)節(jié)盤的后外側(cè)制備直徑為2.5mm全層穿孔,假手術(shù)組僅在切開關(guān)節(jié)囊后即縫合組織。分別于手術(shù)后第4、8、12、16周處死各組三只動(dòng)物,制作顳下頜關(guān)節(jié)標(biāo)本。應(yīng)用Micro-CT掃描并計(jì)算髁突頂部軟骨下骨的骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)、骨表面積/骨體積比(BS/BV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁間距(Tb.Sp)和骨小梁數(shù)(Tb.N),行HE染色及Sox9、MMP-13、VEGF免疫組織化學(xué)染色,Image-ProPlus軟件對髁突中Sox9、MMP-13、VEGF在軟骨下骨區(qū)的表達(dá)進(jìn)行半定量分析,使用SPSS軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:Micro-CT結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組中軟骨下骨骨質(zhì)不連續(xù),骨密度明顯降低。實(shí)驗(yàn)組BV/TV、Tb.Th和Tb.N均顯著低于假手術(shù)組(P0.05),呈先降后升趨勢;實(shí)驗(yàn)組BS/BV和Tb.Sp顯著高于假手術(shù)組(P0.05),呈先升后降趨勢。組織病理學(xué)染色結(jié)果:假手術(shù)組僅在4周時(shí)出現(xiàn)輕度炎癥反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)組髁突表面不規(guī)則伴裂隙、軟骨各層明顯增厚、軟骨細(xì)胞向軟骨下骨內(nèi)侵蝕。第8周后增厚的髁突軟骨開始變薄,第16周髁突關(guān)節(jié)面有骨贅樣結(jié)構(gòu)形成。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組Sox9、MMP-13和VEGF的表達(dá)均顯著高于相同時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組。Sox9、MMP-13在髁突軟骨和軟骨下骨中均明顯表達(dá),VEGF在軟骨層和軟骨下骨中呈弱表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組Sox9、MMP-13和VEGF的表達(dá)均呈上升趨勢,實(shí)驗(yàn)組Sox9的表達(dá)在第8周至第12周階段增加最快,實(shí)驗(yàn)組MMP-13和VEGF的表達(dá)在第12周至第16周階段增加最為迅速。結(jié)論:1.通過后外側(cè)關(guān)節(jié)盤穿孔法,可成功建立了兔顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎模型。2.通過測定軟骨下骨的BV/TV,BS/BV,Tb.Th,Tb.Sp和Tb.N,證實(shí)軟骨下骨的活躍改建是顳下頜關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的一個(gè)重要特征。3.髁突中Sox9、MMP-13和VEGF的表達(dá)和定位具有復(fù)雜的反應(yīng)機(jī)制,對軟骨下骨的骨質(zhì)改建和骨關(guān)節(jié)炎的發(fā)展具有重要意義。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R782.6
【部分圖文】：

圖１?ａｂ．暴露的關(guān)節(jié)盤；ｃ．離體后的關(guān)節(jié)盤??Ｆｉｇ．?１?ａ?ｂ．?ｅｘｐｏｓｅｄ?ａｒｔｉｃｕｌａｒ?ｄｉｓｃ；?ｃ．?ａｒｔｉｃｕｌａｒ?ｄｉｓｃ?ｉｎ?ｖｉｔｒｏ??２．?２．?３?Ｍｉｃｒｏ－ＣＴ對髁突軟骨下骨進(jìn)行影像學(xué)分析??①將取下的ＴＭＪ標(biāo)本用無菌水沖洗干凈后置于４％多聚甲醛固定液中，固定２４小??時(shí)。??②在７０ＫＶ峰值高壓和３５?ｕ?ｍ空間分辨率條件下，用Ｍｉｃｒｏ－ＣＴ對髁突進(jìn)行掃描，??每次掃描四個(gè)髁突，將四個(gè)髁突依次水平放入圓柱形標(biāo)本掃描管（直徑３０ｍｍ，??長１０ｃｍ）內(nèi)，每個(gè)髁突間由泡沫圓片隔開，掃描時(shí)間為２４ｈ。??③在髁狀突頂部軟骨與軟骨下骨交界正下方選擇３個(gè)柱體（橫截面積０．?５ｍｒａ２，長??軸?１．０ｍｍ）作為感興趣區(qū)域（ｒｅｇｉｏｎｓ?ｏｆ?ｉｎｔｒｅｓｔ，Ｒ０Ｉ）。??④運(yùn)用Ｍｉｃｒｏ?Ｖｉｅｗ?ＡＢＡ?２．?１．２軟件自動(dòng)計(jì)算感興趣區(qū)域（Ｒ０Ｉ）內(nèi)的骨體積分??數(shù)（ＢＶ／ＴＶ）、骨表面積／骨體積比（ＢＳ／ＢＶ）、骨小梁厚度（Ｔｂ．Ｔｈ）、骨小梁間??

圖２假手術(shù)組（ＳＧ）和實(shí)驗(yàn)組（ＥＧ）髁突的三維重建圖像。從中間向兩側(cè)依??次為頂視圖、側(cè)視圖和正中矢狀面圖。??Ｆｉｇ．?２?３Ｄ－ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ?ｉｍａｇｅｓ?ｏｆ?ｃｏｎｄｙｌｅｓ?ｏｆ?ＳＧ?ａｎｄ?ＥＧ．?Ｆｒｏｍ?ｔｈｅ?ｍｉｄｄｌｅ?ｔｏ?ｔｈｅ??ｔｗｏ?ｓｉｄｅｓ，?ｔｈｅ?ｉｍａｇｅｓ?ａｒｅ?ｓｕｃｃｅｓｓｉｖｅｌｙ?ｔｈｅ?ａｐｅｘ?ｖｉｅｗ，?ｔｈｅ?ｌａｔｅｒａｌ?ｖｉｅｗ?ａｎｄ?ｔｈｅ??ｍｅｄｉａｎ?ｓａｇｉｔｔａｌ?ｐｌａｎｅ．??

圖４假手術(shù)組（ＳＧ）和實(shí)驗(yàn)組（ＥＧ）髁突ＨＥ染色切片。三角形＝表面不規(guī)則；??星號＝脫細(xì)胞區(qū)；黑色箭頭＝細(xì)胞簇；紅色箭頭＝骨贅。??Ｆｉｇ．?４?ＨＥ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｃｏｎｄｙｌｅｓ?ｏｆ?ＳＧ?ａｎｄ?ＥＧ．?Ｔｒｉａｎｇｌｅｓ＝ｓｕｒｆａｃｅ?ｉｒｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ；??ａｓｔｅｒｉｓｋｓ＝ａｃｅｌｌｕｌａｒ?ｒｅｇｉｏｎｓ；?ｂｌａｃｋ?ａｒｒｏｗｓ＾ｃｅｌｌ?ｃｌｕｓｔｅｒｓ；?ｒｅｄ?ａｒｒｏｗｓ＝ｏｓｔｅｏｐｈｙｔｅ．??
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本文編號：2873272