目的探究由c-Myc調(diào)控的長鏈非編碼RNA7(long non-coding RNA7,lncRNA7)對舌鱗狀細(xì)胞癌(Tongue Squamous Cell Carcinoma,TSCC)SCC3細(xì)胞增殖的影響,從而為舌鱗癌尋找一種新的分子治療靶點(diǎn)。方法構(gòu)建 pLKO.l-shc-Myc-ctrl、pLKO.1-shc-Myc、Flag、Flag-c-Myc 四種慢病毒載體,分別轉(zhuǎn)染SCC3細(xì)胞,Western Blot檢測各組載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后細(xì)胞中c-Myc蛋白的表達(dá)情況;qRT-PCR檢測各組載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞后細(xì)胞中l(wèi)ncRNA7的表達(dá)水平;再構(gòu)建 pLKO.l-shlncRNA7-ctrl、pLKO.1-shlncRNA7 兩種慢病毒載體,qRT-PCR 分別檢測兩組載體轉(zhuǎn)染SSC3細(xì)胞后細(xì)胞中l(wèi)ncRNA7的表達(dá)情況;MTT法和細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)用于檢測lncRNA7對SCC3細(xì)胞生長和增殖能力的影響;熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)檢測lncRNA7在SCC3細(xì)胞中的定位。結(jié)果Western Blot檢測c-Myc蛋白表達(dá)結(jié)果顯示,與pLKO.1-shc-Myc-ctrl對照組相比,pLKO.1-shc-Myc組蛋白表達(dá)下調(diào);與Flag對照組相比,Flag-c-Myc組蛋白表達(dá)上調(diào);qRT-PCR結(jié)果顯示pLKO.1-shc-Myc組lncRNA7的表達(dá)水平較pLKO.1-shc-Myc-ctrl 對照組降低;Flag-c-Myc 組 lncRNA7 的表達(dá)水平較 Flag 對照組升高;pLKO.1-shlncRNA7 組 lncRNA7 表達(dá)水平較 pLKO.1-shlncRNA7-ctrl 組下調(diào);MTT法和細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與pLKO.l-shlncRNA7-ctrl組相比,pLKO.1-shlncRNA7組SCC3細(xì)胞生長和增值能力減弱:熒光原位雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明lncRNA7定位于細(xì)胞質(zhì)中。結(jié)論下調(diào)受c-Myc正調(diào)控的lncRNA7能抑制舌鱗癌SCC3細(xì)胞的生長和增殖,從而可能為舌鱗癌的基因治療提供新靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.86
【部分圖文】：

蛋白的表達(dá)情況。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ組ｃ－Ｍｙｃ蛋白表達(dá)水平明??顯低于ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ－ｃｔｒｌ對照組，說明ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ組載體下調(diào)了?ＳＣＣ３細(xì)胞??中的ｃ－Ｍｙｃ的表達(dá)（圖１）。??分別將構(gòu)建成功的Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ組和Ｆｌａｇ對照組的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入ＳＣＣ３細(xì)胞??中，通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)檢測其中ｃ－Ｍｙｃ蛋白的表達(dá)情況。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，??Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ組ｃ－Ｍｙｃ蛋白表達(dá)水平明顯高于Ｆｌａｇ對照組，說明Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ組載體上??調(diào)了ＳＣＣ３細(xì)胞中的ｃ－Ｍｙｃ的表達(dá)（圖２）。??ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ?Ｆｌａｇ?Ｆｌａｇ－??－ｃｔｒｌ對照組?－Ｍｙｃ組?對照組?ｃ＿Ｍｙｃ組??ｃ－Ｍｙｃ?．?ｃ＿Ｍｙｃ??Ａｃｔｉｎ?Ａｃｔｉｎ??圖１下調(diào)ＳＣＣ３細(xì)胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表達(dá)?圖２上調(diào)ＳＣＣ３細(xì)胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表達(dá)??Ｆｉｇ．?１?Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｆｉｇ．?２?Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ??３．?２?ｑＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)方法檢測ｃ－Ｍｙｃ對ｌｎｃＲＮＡ７表達(dá)的影響??通過ｑＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)方法分別撿測成功轉(zhuǎn)染了?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ組和??２６??

通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ實(shí)驗(yàn)檢測其中ｃ－Ｍｙｃ蛋白的表達(dá)情況。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，??Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ組ｃ－Ｍｙｃ蛋白表達(dá)水平明顯高于Ｆｌａｇ對照組，說明Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ組載體上??調(diào)了ＳＣＣ３細(xì)胞中的ｃ－Ｍｙｃ的表達(dá)（圖２）。??ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ?Ｆｌａｇ?Ｆｌａｇ－??－ｃｔｒｌ對照組?－Ｍｙｃ組?對照組?ｃ＿Ｍｙｃ組??ｃ－Ｍｙｃ?．?ｃ＿Ｍｙｃ??Ａｃｔｉｎ?Ａｃｔｉｎ??圖１下調(diào)ＳＣＣ３細(xì)胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表達(dá)?圖２上調(diào)ＳＣＣ３細(xì)胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表達(dá)??Ｆｉｇ．?１?Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｆｉｇ．?２?Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ??３．?２?ｑＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)方法檢測ｃ－Ｍｙｃ對ｌｎｃＲＮＡ７表達(dá)的影響??通過ｑＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)方法分別撿測成功轉(zhuǎn)染了?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ組和??２６??

ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ－ｃｔｒｌ對照組的ＳＣＣ３細(xì)胞中ｌｎｃＲＮＡ７的表達(dá)情況。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以??看出，ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ組ＳＣＣ３中ｌｎｃＲＮＡ７表達(dá)水平明顯低于ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ－ｃｔｒｌ??對照組，說明ＳＣＣ３細(xì)胞中ｌｎｃＲＮＡ７的表達(dá)水平隨ｃ－Ｍｙｃ的下調(diào)而降低（圖３）。??通過ｑＲＴ－ＰＣＲ實(shí)驗(yàn)方法分別檢測成功轉(zhuǎn)染了?Ｈ?ａｇ－ｃ－Ｍｙｃ組和Ｆｌａｇ對照組的??ＳＣＣ３細(xì)胞中ｌｎｃＲＮＡ７的表達(dá)情況。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ組ＳＣＣ３中??１?ｎｃ?ＲＮ?Ａ７表達(dá)水平明顯高于Ｆ１?ａｇ對照組，說明ＳＣＣ３細(xì)胞中１?ｎｃ?ＲＮ?Ａ７的表達(dá)水平隨??ｃ－Ｍｙｃ的上調(diào)而升高（圖４）。從正反兩面結(jié)果均表明
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Wei-Jun Cao;Hai-Lu Wu;Bang-Shun He;Yu-Shu Zhang;Zhen-Yu Zhang;;Analysis of long non-coding RNA expression profiles in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2013年23期

本文編號：2871192