目的探索人舌鱗癌細(xì)胞株Tca8113中側(cè)群細(xì)胞的分選方法。方法利用流式細(xì)胞儀分選傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)方法獲得的人舌鱗癌細(xì)胞系Tca8113中的側(cè)群細(xì)胞(SP),并與無(wú)血清培養(yǎng)方法分離出的側(cè)群細(xì)胞(TSC-SP)進(jìn)行形態(tài)學(xué)比較和平板形成克隆實(shí)驗(yàn)及成瘤實(shí)驗(yàn)的比較,富集并驗(yàn)證腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群。結(jié)果人舌癌細(xì)胞系Tca8113中SP細(xì)胞的含量為0.2%,而Tca8113細(xì)胞系的細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中能夠成活,3~5 d后增殖并形成懸浮的腫瘤干細(xì)胞球,并隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而腫瘤干細(xì)胞球體積增大和更加致密;而應(yīng)用無(wú)血清懸浮法培養(yǎng)的Tca8113細(xì)胞系中TSC-SP細(xì)胞的含量為0.4%;SP與TSC-SP細(xì)胞在平板形成克隆實(shí)驗(yàn)的形成率均為100%;接種16 d后,104、105數(shù)量級(jí)的TSC-SP和SP接種裸鼠背部均出現(xiàn)瘤體。結(jié)論人舌鱗癌細(xì)胞系Tca8113中含極少量的SP細(xì)胞,利用無(wú)血清培養(yǎng)基可以達(dá)到富集腫瘤干細(xì)胞亞群的目的。
【部分圖文】：

2. 1　普通培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基中的Tca8113細(xì)胞的形態(tài)　　普通培養(yǎng)基中Tca8113呈貼壁生長(zhǎng)(圖1),部分細(xì)胞凋亡呈懸浮狀態(tài)。普通培養(yǎng)基中處于生長(zhǎng)期的Tca8113細(xì)胞移植于無(wú)血清培養(yǎng)基中, 24~48 h后,部分細(xì)胞聚集呈球狀,而大部分細(xì)胞呈懸浮狀(圖2)。3~5 d后無(wú)血清培養(yǎng)基中的細(xì)胞球增多,體積變大,更加緊密。圖1　倒置相差顯微鏡觀察在普通培養(yǎng)基中呈貼壁生長(zhǎng)的Tca8113(×200)圖2　倒置相差顯微鏡觀察在無(wú)血清培養(yǎng)基中呈懸浮生長(zhǎng)的Tca8113　(×200)2. 2　Tca8113細(xì)胞系中TSC-SP與SP細(xì)胞的檢測(cè)　　Tca8113細(xì)胞系中SP數(shù)量較少,約為0. 2%。而在無(wú)血清懸浮培養(yǎng)中的TSC-SP細(xì)胞的數(shù)量約為0. 4% (圖3)。2. 3　TSC-SP與SP細(xì)胞交替在無(wú)血清培養(yǎng)基中和傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)中培養(yǎng)　　TSC-SP與SP所形成的腫瘤球接種于傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)基中

2. 2　Tca8113細(xì)胞系中TSC-SP與SP細(xì)胞的檢測(cè)　　Tca8113細(xì)胞系中SP數(shù)量較少,約為0. 2%。而在無(wú)血清懸浮培養(yǎng)中的TSC-SP細(xì)胞的數(shù)量約為0. 4% (圖3)。2. 3　TSC-SP與SP細(xì)胞交替在無(wú)血清培養(yǎng)基中和傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)中培養(yǎng)　　TSC-SP與SP所形成的腫瘤球接種于傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)基中,經(jīng)誘導(dǎo)腫瘤干細(xì)胞分化為普通的腫瘤細(xì)胞,約12 h后部分細(xì)胞開(kāi)始貼壁, 24~48 h后完全貼壁,顯微鏡下的貼壁細(xì)胞與傳統(tǒng)含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)下的貼壁細(xì)胞無(wú)明顯差異;消化貼壁細(xì)胞后,重新懸于無(wú)血清培養(yǎng)基中, 3~5 d后仍可形成細(xì)胞球,其形態(tài)與原代相同。819第33卷第8期2011年4月30日　　　　　　　　　　第　三　軍　醫(yī)　大　學(xué)　學(xué)　報(bào)J　Third　Mil　Med　Univ　　　　　　　　　　Vo.l 33

率均為100% )。取相同數(shù)量細(xì)胞的平板克隆培養(yǎng)板,顯微鏡下觀察均發(fā)現(xiàn)TSC-SP細(xì)胞所形成的克隆細(xì)胞數(shù)量較多,體積較大(圖4A),而SP細(xì)胞所形成的克隆細(xì)胞數(shù)量較少,體積較小(圖4B)。在相同數(shù)量細(xì)胞的平板克隆實(shí)驗(yàn)中,根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,TSC-SP與SP均具有顯著差異性(P<0. 05),相同數(shù)量的TSC-SP比SP具有較強(qiáng)的克隆形成能力(表1)。A:TSC-SP細(xì)胞;B:SP細(xì)胞圖4　倒置相差顯微鏡觀察TSC-SP細(xì)胞和SP細(xì)胞的平板克隆實(shí)驗(yàn)(初始細(xì)胞為100個(gè),2. 5周×200)表1　平板克隆實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞集落直徑(第3周末,cm)細(xì)胞種類50個(gè)細(xì)胞100個(gè)細(xì)胞200個(gè)細(xì)胞TSC-SP 0. 080±0. 016 0. 180±0. 016 0. 318±0. 019SP 0. 060±0. 019 0. 150±0. 016 0. 280±0. 016P值0. 019 0. 04 0. 032. 5　體外成瘤實(shí)驗(yàn)的結(jié)果　　在相同條件下(觀察時(shí)間0~8周)
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

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【共引文獻(xiàn)】

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1 平軼芳;CXCR4在膠質(zhì)瘤干細(xì)胞誘導(dǎo)血管生成中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 卞修武;;對(duì)腫瘤血管生成研究之腫瘤微血管構(gòu)筑表型異質(zhì)性的思考[J];中華病理學(xué)雜志;2006年03期

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