目的 對(duì)不同來(lái)源的人脂肪干細(xì)胞(ASCs)進(jìn)行體外增殖培養(yǎng),對(duì)比其多種細(xì)胞生物學(xué)特征及增殖潛能。對(duì)人ASCs進(jìn)行體外成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng),對(duì)比研究?jī)煞N來(lái)源的ASCs成骨活性的差異。探討頰脂墊作為潛在的富含ASCs的供體,在骨組織工程領(lǐng)域,尤其是應(yīng)用骨組織工程技術(shù)在口腔頜面外科骨缺損修復(fù)中的應(yīng)用價(jià)值。 材料與方法 無(wú)菌條件下分別提取新鮮的超聲乳化負(fù)壓吸脂術(shù)所得腹部皮下脂肪和面部輪廓整形手術(shù)切取人頰脂墊脂肪各10ml,Ⅰ型膠原酶消化,離心后提取ASCs,原代培養(yǎng)14天時(shí),對(duì)兩組細(xì)胞進(jìn)行消化,計(jì)數(shù),此后每3天換液一次,達(dá)80%融合時(shí)傳代。分別取兩種來(lái)源生長(zhǎng)良好的第5代ASCs,通過(guò)CCK-8試劑盒操作要求測(cè)定兩組ASCs的增殖指數(shù),以此檢測(cè)兩組ASCs增殖潛能的差別；并對(duì)其進(jìn)行成骨培養(yǎng),分別于3、7、14天,利用堿性磷酸酶試劑盒操作要求測(cè)定兩組細(xì)胞的堿性磷酸酶活性,并從成骨培養(yǎng)第1天開(kāi)始,連續(xù)7天測(cè)量其增殖指數(shù),比較兩組ASCs在經(jīng)過(guò)成骨培養(yǎng)后其增殖潛能和成骨潛能有何差異。 數(shù)據(jù)均由作者采用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析,以P0.05為差異有顯著性意義。 結(jié)果 1、人頰脂墊為特化脂肪組織,血管成分明顯多于皮下脂肪。頰脂墊提取ASCs密度為(8.77±1.28)×104/ml,顯著高于吸脂術(shù)來(lái)源者(6.00±0.47)×104ml; ASCs(?)中植入培養(yǎng)瓶中48h滯留期后可見(jiàn)少量的梭形細(xì)胞貼壁,細(xì)胞形態(tài)不一,核居中。從第3天開(kāi)始,進(jìn)入增殖期快速期,細(xì)胞培養(yǎng)至第7天,可見(jiàn)細(xì)胞以集落或散在的方式增長(zhǎng),兩個(gè)不同部位的ASCs形態(tài)差異較小,均以梭形和多角型為主,但頰脂墊部位ASCs形態(tài)更加均一。細(xì)胞培養(yǎng)至第3代,開(kāi)始表現(xiàn)快速增殖,頰脂墊來(lái)源ASCs形態(tài)較吸脂術(shù)來(lái)源者,形態(tài)更加均一且增殖更快。ASCs逐漸長(zhǎng)滿瓶壁,經(jīng)傳代培養(yǎng)逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榫坏亩噙呅巍?2、不同來(lái)源ASCs,其表面標(biāo)志CD44均呈陽(yáng)性表達(dá),造血干細(xì)胞的標(biāo)志CD34均呈陰性表達(dá),結(jié)果顯示,ASCs具有間充質(zhì)干細(xì)胞的表型特征。 3、經(jīng)成骨培養(yǎng)后,ASCs的增殖速度較未成骨培養(yǎng)前明顯減慢,經(jīng)成骨誘導(dǎo)后的兩組ASCs相比,在前3天,誘導(dǎo)后的ASCs的增殖速度與未誘導(dǎo)時(shí)ASCs差異不大；4—7天時(shí),頰脂墊部位成骨誘導(dǎo)的ASCs的增殖速度顯著快于吸脂術(shù)來(lái)源的ASCs成骨誘導(dǎo)后的增殖速度。且P0.05,兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4、人不同部位ASCs成骨培養(yǎng)3天后,堿性磷酸酶活性頰脂墊組為15.8±1.25u/100ml,吸脂術(shù)組為9.43±1.65u/100ml, ASCs成骨培養(yǎng)7天后,堿性磷酸酶活性頰脂墊組為33.84±7.44u/100ml,吸脂術(shù)組為18.66±3.70u/100m1,成骨培養(yǎng)14天時(shí),堿性磷酸酶活性頰脂墊組為61.56±5.43u/100ml,吸脂術(shù)組為45.03±4.56u/100m1,所有結(jié)果經(jīng)t檢驗(yàn),均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論 1、人頰脂墊部位來(lái)源的ASCs相比吸脂術(shù)來(lái)源的ASCs,單位體積組織內(nèi)可提取的ASCs密度更高；且頰脂墊來(lái)源ASCs增殖活性高于吸脂術(shù)來(lái)源ASCs,且具有更高的成骨活性。 2、人頰脂墊脂肪易于獲得,供區(qū)提取造成的損傷小,無(wú)明顯術(shù)后并發(fā)癥；并且頰脂墊組織的血管豐富,不同人群頰脂墊組織的大小是相似的,它們獨(dú)立于體重和脂肪的分布,不會(huì)受到體重和脂肪分布的影響,是穩(wěn)定可靠的ASCs組織來(lái)源。 3、頰脂墊有望成為未來(lái)口腔頜面部,乃至全身各處骨組織工程種子細(xì)胞的理想供源。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R782.2
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)說(shuō)明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
實(shí)驗(yàn)一 兩種組織來(lái)源脂肪干細(xì)胞（ASCs）體外培養(yǎng)與生物學(xué)特性對(duì)比研究
    1.1 兩種組織來(lái)源脂肪干細(xì)胞（ASCs）提取
        1.1.1 研究對(duì)象
        1.1.2 儀器設(shè)備
        1.1.3 試劑及溶液配制
        1.1.4 流程圖
        1.1.5 脂肪干細(xì)胞（ASCs）原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)
    1.2 兩種組織來(lái)源脂肪干細(xì)胞（ASCs）體外培養(yǎng)與生物學(xué)特性研究
        1.2.1 儀器設(shè)備
        1.2.2 脂肪干細(xì)胞（ASCs）的形態(tài)學(xué)觀察及細(xì)胞計(jì)數(shù)
        1.2.3 脂肪干細(xì)胞（ASCs）增殖曲線的繪制
        1.2.4 脂肪干細(xì)胞（ASCs）表面標(biāo)志檢測(cè)
        1.2.5 數(shù)據(jù)分析
    1.3 結(jié)果
        1.3.1 脂肪干細(xì)胞（ASCs）細(xì)胞形態(tài)比較
        1.3.2 不同來(lái)源脂肪干細(xì)胞（ASCs）的表型鑒定
        1.3.3 原代提取不同來(lái)源脂肪干細(xì)胞（ASCs）的密度
        1.3.4 脂肪干細(xì)胞（ASCs）增殖能力比較
    1.4 討論
實(shí)驗(yàn)二 兩種組織來(lái)源脂肪干細(xì)胞（ASCs）成骨培養(yǎng)
    2.1 脂肪干細(xì)胞（ASCs）的成骨培養(yǎng)及各項(xiàng)檢測(cè)
        2.1.1 技術(shù)路線
        2.1.2 設(shè)備及試劑材料
        2.1.3 脂肪干細(xì)胞（ASCs）成骨培養(yǎng)
        2.1.4 脂肪干細(xì)胞（ASCs）成骨培養(yǎng)后增殖曲線的繪制
        2.1.5 BCA法測(cè)脂肪干細(xì)胞（ASCs）蛋白含量
        2.1.6 脂肪干細(xì)胞（ASCs）堿性磷酸酶活性測(cè)定
        2.1.7 成骨染色
        2.1.8 數(shù)據(jù)分析
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 成骨培養(yǎng)后脂肪干細(xì)胞（ASCs）增殖能力比較
        2.2.2 ALP活性比較
        2.2.3 脂肪干細(xì)胞（ASCs）成骨分化能力
    2.3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明
附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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6 李俊憲;孫恒赟;袁捷;趙明衍;韋敏;;流式細(xì)胞儀分選純化人脂肪干細(xì)胞體外成骨活性的實(shí)驗(yàn)研究[J];組織工程與重建外科雜志;2010年06期

本文編號(hào)：2855597