堿性磷酸酶(ALP)是較為肯定的參與鈣化的酶類。牙髓組織富含ALP，其性質(zhì)與肝／骨／腎型ALP相似。研究牙髓ALP的生化性質(zhì)將有助于闡明牙髓、牙本質(zhì)的鈣化修復(fù)機(jī)制。 氫氧化鈣制劑是目前臨床首選的蓋髓藥物，它具有獨(dú)特的促進(jìn)牙髓、牙本質(zhì)修復(fù)的作用，但其作用機(jī)制尚不清楚。最新研究表明：牙髓細(xì)胞具有創(chuàng)傷后轉(zhuǎn)化為造牙本質(zhì)細(xì)胞的性質(zhì)，因此，研究氫氧化鈣對牙髓細(xì)胞的合成代謝的作用，對于進(jìn)一步了解氫氧化鈣的作用機(jī)制具有一定的意義。 本文采用正丁醇抽提法和層析法提純了狗牙髓ALP。對其性質(zhì)研究表明：牙髓ALP的PAGE圖譜為1條帶，分子量約為129000；熱穩(wěn)定性較差；最適pH10.1；底物濃度為6mmol／L時反應(yīng)達(dá)到飽和、Mg~(2+)、Za~(2+)強(qiáng)烈激活、Ca~(2+)輕度激活、EDTA明顯抑制ALP活性。牙髓ALP性質(zhì)與腎ALP相似，屬于L／B／K型ALP。 采用基因工程技術(shù)，研究細(xì)胞中基因表達(dá)情況，有助于從分子水平上了解藥物的作用機(jī)理。從細(xì)胞全基因組文庫中獲得目的基因的工程量大，耗時耗力，且不現(xiàn)實(shí)。因此，我們以體外合成的大鼠L／B／K-ALP。cDNA的高保守性的ALP活性區(qū)的2段核苷酸序列為引物，采用反轉(zhuǎn)錄PCR和定序克隆獲得大鼠L／B／K-ALP部分cDNA的分子克隆。酶切分析表明插入片段大小約為188bp，符合預(yù)期大小。 ~3H-TdR、~3HUR摻入結(jié)果顯示：0.055mmol／L氫氧化鈣具有促進(jìn)大鼠牙髓細(xì)胞DNA、RNA合成的作用。以光敏生物素標(biāo)記的大鼠L／B／K-ALP
【學(xué)位單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：1991
【中圖分類】：R78
【部分圖文】：

為ALP亞墓帶，衛(wèi)增為多條帶，了2弓01〕(圖1一6)、后者為牙髓ALP抽提物中的主要蛋白質(zhì)。腎ALP電泳結(jié)合團(tuán)金FAGE電泳結(jié)果，涌定腎ALP亞墓分子量七及DC陽，對。;66A腎從P4，，4.了14.;困卜6ALP的SDS一PAGE電泳圖譜B牙髓ALPC標(biāo)準(zhǔn)分?

兩a了又erV丁TK一憶pcD盯A圖2一2‘大鼠L用/K一LPcDNA的AGE圖譜二4上.幾。I日m七d習(xí)Hjndrece門binan七丁丁丁M.rkor3〔)1習(xí)6二idD丫A圖2一3大鼠L/B/K一ALPoD毗克隆的酶切圖譜一43一

‘大鼠L/KLPcD的AGE圖
【引證文獻(xiàn)】

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1 黃先菊;;兩種方法修復(fù)牙齒楔狀缺損的臨床療效比較[J];攀枝花學(xué)院學(xué)報(bào);2007年06期

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本文編號：2839434