目的:本研究旨在通過(guò)紅/綠茶多酚(tea polyphenols,TP)對(duì)人唾液α-淀粉酶(human salivaryα-amylase,HSA)的酶促動(dòng)力學(xué)和熒光猝滅實(shí)驗(yàn),從HSA活性的改變和分子結(jié)構(gòu)的變化考察紅/綠茶TP與HSA相互作用的效果和特異性,從而為解釋紅/綠茶TP對(duì)口腔感覺(jué)的收斂性作用和口腔中茶源性色素沉著的生理意義奠定理論基礎(chǔ)。方法:在無(wú)抑制劑和紅/綠茶TP抑制劑下,用540 nm的不間斷波長(zhǎng)檢測(cè)HSA催化水解淀粉生成麥芽糖的吸光度,從而計(jì)算出反應(yīng)速度,由Lineweaver Burk圖求出動(dòng)力學(xué)參數(shù):最大反應(yīng)速度(Vmax)、酶 底物解離常數(shù)(Ks)和酶 抑制劑解離常數(shù)(Ki)。統(tǒng)計(jì)分析參數(shù)間的差異并確定抑制類(lèi)型。在285 nm(λex)的激發(fā)波長(zhǎng)下,加入不同濃度的紅/綠茶TP溶液,觀察HSA的熒光強(qiáng)度變化。通過(guò)作出的熒光光譜圖計(jì)算Stern-Volmer猝滅常數(shù)(KSV)、雙分子猝滅常數(shù)(kq)、靜態(tài)猝滅常數(shù)(KS)、表觀靜態(tài)猝滅結(jié)合常數(shù)(KA)和表觀靜態(tài)猝滅常數(shù)(K)以及其他熒光猝滅相關(guān)的參數(shù),判斷紅/綠茶TP對(duì)HSA的熒光猝滅類(lèi)型,統(tǒng)計(jì)分析紅茶和綠茶間熒光猝滅參數(shù)的差異。結(jié)果:紅/綠茶與無(wú)抑制劑Vmax之間的差異和綠茶抑制劑與無(wú)抑制劑Ks之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),紅茶TP對(duì)HSA的抑制為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制型,綠茶TP對(duì)HSA的抑制為反競(jìng)爭(zhēng)性抑制型;紅茶抑制劑Ks大于綠茶(P0.05);而紅茶抑制劑Ki小于綠茶(P0.05)。熒光猝滅中紅/綠茶TP的kq大于雙分子擴(kuò)散限制性猝滅常數(shù)值(1×1010 M-1s-1),且伴隨紅/綠茶TP溶液濃度增加,熒光發(fā)射波長(zhǎng)(λem)發(fā)生藍(lán)移,綠茶的藍(lán)移效果(18 nm)比紅茶(5 nm)強(qiáng);紅茶為靜態(tài)猝滅,綠茶是以靜態(tài)猝滅為主的動(dòng)靜態(tài)聯(lián)合猝滅;紅/綠茶TP分子與HSA分子上一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合(n = 1)。紅茶和綠茶之間的熒光猝滅參數(shù)KS、KA和K均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異;紅茶猝滅劑的KS和K均大于綠茶(P0.05),而紅茶猝滅劑的KA小于綠茶(P0.05)。結(jié)論:紅茶對(duì)HSA抑制效果強(qiáng)于綠茶,形成較穩(wěn)定的復(fù)合物。綠茶引起HSA分子疏水性增大以及蛋白質(zhì)分子的折疊的效果強(qiáng)于紅茶;由于HSA蛋白質(zhì)分子的折疊,導(dǎo)致在實(shí)際親和性反應(yīng)中表現(xiàn)出紅茶與HSA的親和性大于綠茶。故在生活中飲用紅茶者,會(huì)產(chǎn)生較強(qiáng)的粘膜收斂性的感覺(jué),其茶色素易于在牙齒表面沉積。
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類(lèi)】：R780.2
【部分圖文】：

圖 2-2 紅茶對(duì) HSA 的熒光猝滅圖Figure 2-2. The plot of quenching for HSA with the black tea

圖 2-2 紅茶對(duì) HSA 的熒光猝滅圖Figure 2-2. The plot of quenching for HSA with the black tea

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王潔;;多酚-蛋白質(zhì)相互作用的影響因素及其功能特性研究進(jìn)展[J];河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年03期

本文編號(hào)：2821579