目的糖尿病是目前繼心臟病、腫瘤嚴重危害人們健康的疾病,隨著老齡化社會的到來,糖尿病發(fā)病率逐年增加。骨骼系統(tǒng)是一種動態(tài)性組織器官,糖尿病性骨質(zhì)疏松(DOP)屬于繼發(fā)性O(shè)P,是DM最常見的一種并發(fā)癥,伴隨營養(yǎng)、代謝、內(nèi)分泌等多因素的變化而發(fā)生的一系列病理性改變。 近年來,隨著口腔頜面整形外科和口腔種植技術(shù)的成熟和完善,手術(shù)適應(yīng)癥范圍更加廣泛。如何應(yīng)對糖尿病并發(fā)的骨質(zhì)疏松已是口腔科醫(yī)生所面臨的重要任務(wù)之一。所以對口腔疾病的預(yù)防和治療要考慮到全身因素影響,而全身疾病的治療也是口腔疾病治療的重要組成部分,一方面應(yīng)考慮糖尿病并發(fā)的骨質(zhì)疏松對口腔疾病的影響,另一方面又要從治療的角度來分析繼發(fā)的骨質(zhì)疏松與牙科疾病的關(guān)系,進一步提高口腔疾病的預(yù)防和治療。 本實驗通過建立兩型糖尿病大鼠模型,檢測血生化、糖、脂代謝和骨代謝指標(biāo),檢測右下頜牙槽骨骨密度,熒光顯微鏡觀察左下頜牙槽骨微觀結(jié)構(gòu)及測量骨組織形態(tài)計量動態(tài)學(xué)參數(shù)。了解兩型糖尿病大鼠早期血生化、糖、脂、骨代謝、骨密度、骨微結(jié)構(gòu)的變化,探討兩型糖尿病是否導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生,并初步探討其可能的機制。 方法:本研究共分四個方面 1實驗動物模型制備 66只(♀20、♂46)Wistar大鼠平均體重250±3g,購自山東大學(xué)實驗動物中心(動物質(zhì)量合格證書編號:魯動質(zhì)字RP20021024號),飼養(yǎng)在山東省內(nèi)分泌與代謝病研究所中心實驗室(二級動物室)。實驗分成兩大組:第一大組由雌性大鼠20只,雄性大鼠隨機選出21只組成,用于建立2型糖尿病模型及正常對照;第二大組由隨機剩余的雄性大鼠25只組成,用于建立1型糖尿病模型及正常對照。自模型建立至終止實驗飼養(yǎng)20周。 2實驗動物模型標(biāo)本的收集與制作 用鹽酸氯胺酮(100 mg/kg B.W、、)腹腔注射麻醉大鼠,頸靜脈和心室取血處死,提取血清;完整離斷左、右側(cè)下頜骨,仔細剝離軟組織,右側(cè)下頜骨用等滲生理鹽水浸濕的紗布包囊,-20℃冰箱內(nèi)保存,留作測量BMD,見照片1-3。左側(cè)下頜骨置于70%乙醇溶液中,4℃保存,留作骨形態(tài)指標(biāo)的觀察與動態(tài)指標(biāo)的分析。 3實驗動物模型標(biāo)本的離體試驗 包括血清糖、脂、骨代謝和生化指標(biāo)及尿鈣的測定;大鼠右側(cè)下頜骨BMD測定;大鼠左側(cè)下頜牙槽骨不脫鈣骨組織的制備,選取磨牙根部區(qū)域牙槽骨近遠中向,切成10 um不脫鈣骨組織切片,并進行骨組織動態(tài)參數(shù)計量及熒光顯微鏡下骨組織形態(tài)的觀察。 4統(tǒng)計分析 所有數(shù)據(jù)在列表時均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)表示,用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包進行處理,對測定結(jié)果進行正態(tài)分布性及方差齊性檢驗,組間比較采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的t檢驗,以P＜0.05認為有顯著性差異。 結(jié)果 1觀察實驗糖尿病大鼠模型 T1DM大鼠在腹腔注射STZ后5-7天開始出現(xiàn)多飲、多食、多尿:T2DM大鼠在注射STZ后8-10天三多癥狀較T1DM大鼠輕。造模8周后兩大組DM大鼠的三多一少癥狀開始明顯,T1DM(N)大鼠可見明顯消瘦,毛色暗淡,無光澤,行動遲緩,精神也不如T2DM大鼠及T1DM(I)大鼠。正常對照組的大鼠飲水、進食正常,精神狀況良好、動作自如、反應(yīng)靈敏,體重明顯增加,但N♀和N♂組體重高于N組大鼠的體重,符合代表的兩型DM對照組的增齡要求,毛色有光澤。2只T1DM(N)大鼠因白內(nèi)障完全失明,5只T2DM大鼠并發(fā)白內(nèi)障但未完全失明,有光感。DM大鼠尾巴出現(xiàn)程度不同的潰爛,以T1DM(N)大鼠最為嚴重,尾巴只有原長的1/3-1/5。在實驗過程中,正常組的大鼠體重增長快,DM組大鼠隨著糖尿病病程延長而日漸消瘦,出現(xiàn)生長抑制現(xiàn)象,體重下降明顯。 2模擬糖尿病模型研究,造模20周,各組大鼠體重變化的比較T2DM中,N♂和T2DM♂大鼠體重均高于N♀和T2DM♀大鼠,有顯著性差異(P＜0.05);T2DM♀和T2DM♂大鼠體重均低于N♀和N♂,有顯著性差異(P＜0.05)。 T1DM中,T1DM(N)大鼠體重低于N和T1DM(I),有顯著性差異(P＜0.05);T1DM(I)大鼠體重低于N組,有顯著性差異(P＜0.05)。 T2DM組中♂大鼠的體重與T1DM組比較,N♂＞N,T2DM♂＞T1DM(I)＞T1DM(N),有顯著性差異(P＜0.05)。 以上測定結(jié)果見表1-3。 3模擬糖尿病模型研究,造模20周,骨密度檢測結(jié)果的比較: T2DM中,N♂和T2DM♂大鼠牙槽骨骨密度均高于N♀和T2DM♀大鼠,有顯著性差異(P＜0.05);T2DM♀和T2DM♂大鼠牙槽骨骨密度均低于N♀和N♂,有顯著性差異(P＜0.05)。T2DM♂與N♂大鼠進行頜骨與全身骨組織比較,得出正常大鼠的骨密度高低依次為:股骨＞下頜骨＞腰椎,有顯著性差異(P＜0.05);T2DM大鼠的骨密度高低依次為:下頜骨≈股骨＞腰椎,有顯著性差異(P＜0.05)。 T1DM中,T1DM(N)大鼠下頜骨骨密度低于N和T1DM(I),有顯著性差異(P＜0.05);T1DM(I)大鼠下頜骨骨密度與N組無顯著性差異(P＞0.05)。 T2DM組中♂大鼠下頜骨骨密度與T1DM組比較,N♂≈N,T2DM♂≈T1DM(I)＞T1DM(N)。 以上測定結(jié)果見表4-6。 4模擬糖尿病模型研究,造模20周,兩型糖尿病大鼠血糖、脂代謝、骨代謝及生化指標(biāo)和尿鈣測定結(jié)果的比較: 糖代謝:T1DM和T2DM大鼠血糖均高于正常對照,有顯著性差異(P＜0.05);T1DM(N)與T1DM(I),T2DM♀與T2DM♂之間無顯著性差異(P＞0.05)。 T2DM♀大鼠胰島素水平略高于正常對照,有顯著性差異(P＜0.05);T2DM♂大鼠胰島素水平與正常對照無顯著性差異(P＞0.05);T2DM♀與T2DM♂之間也無顯著性差異(P＞0.05)。造模9周后T2DM♀與T2DM♂大鼠胰島素抵抗水平與正常對照有顯著性差異(P＜0.05)。 T1DM(N)與T1DM(I)大鼠胰島素水平低于正常對照,有顯著性差異(P＜0.05);T1DM(N)與T1DM(I)之間也有顯著性差異(P＜0.05)。T1DM大鼠胰島素抵抗水平與正常對照無顯著性差異(P＞0.05)。 糖代謝結(jié)果顯示2型糖尿病大鼠造模9周后均出現(xiàn)胰島素抵抗,分別成功建立了1型和2型糖尿病大鼠。 脂代謝:T2DM♀和T2DM♂大鼠血清TG、TC均高于N♀和N♂,有顯著性差異(P＜0.05);T1DM(N)大鼠血清TC低于N和T1DM(I),有顯著性差異(P＜0.05);T1DM中TG均無顯著性差異(P＞0.05)。 骨代謝:DM大鼠血清OCN含量降低,除T1DM(I)組均有顯著差異(P＜0.05);而DM大鼠血清IGF-1均低于正常對照組,有顯著差異(P＜0.05);DM大鼠血清TRACP明顯升高,有顯著差異(P＜0.05);T1DM(I)與T1DM(N)組之間也有顯著性差異(P＜0.05)。 生化指標(biāo):兩型糖尿病大鼠與其正常對照組間血磷含量無顯著差異(P＞0.05);血鈣除T1DM(N)組下降,其余也無顯著差異(P＞0.05)。 尿鈣:DM大鼠尿Ca值升高,有顯著差異(P＜0.05)。 以上測定結(jié)果見表7-8。 5模擬糖尿病模型研究,造模20周,牙槽骨骨組織形態(tài)動態(tài)參數(shù)計量結(jié)果的比較: T2DM中,T2DM♀大鼠牙槽骨MS/BS、BFR、MAR均低于N♀大鼠,而Mlt長于N♀大鼠,均有顯著性差異(P＜0.05);T2DM♂大鼠牙槽骨MAR低于N♂大鼠,有顯著性差異(P＜0.05),其余3項均無顯著性差異(P＞0.05)。T2DM♂大鼠牙槽骨MS/BS、BFR均高于T2DM♀大鼠,而Mlt短于T2DM♀大鼠,均有顯著性差異(P＜0.05)。 T1DM中,T1DM(N)大鼠牙槽骨MS/BS、BFR、MAR均低于N和T1DM(I)大鼠,而Mlt長于N和T1DM(I)大鼠,均有顯著性差異(P＜0.05);T1DM(I)大鼠牙槽骨MAR高于N大鼠,有顯著性差異(P＜0.05),其余3項均無顯著性差異(P＞0.05)。T1DM(I)大鼠牙槽骨MS/BS、BFR、MAR均高于T1DM(N)大鼠,而Mlt短于T1DM(N)大鼠,均有顯著性差異(P＜0.05)。 以上測定結(jié)果見表9。 6模擬糖尿病模型研究,造模20周,熒光顯微鏡下觀察牙槽骨的骨形成的比較: 在熒光顯微鏡下可見暗綠色背景上有黃綠色熒光標(biāo)記區(qū),T1DM(N)、T2DM♀、T2DM♂大鼠牙槽骨顯示熒光標(biāo)記區(qū)成骨不活躍,見明顯的吸收陷窩,程度依次減輕。T1DM(I)和正常對照大鼠牙槽骨顯示熒光標(biāo)記區(qū)成骨活躍,未見明顯的吸收陷窩。見圖1-7。 7模擬糖尿病模型研究,造模20周,兩型糖尿病引起的血生化、糖代謝、脂代謝、骨代謝紊亂和骨微結(jié)構(gòu)動態(tài)參數(shù)變化的相互關(guān)系: ①T2DM♀,血清OCN、IGF-1與牙槽骨MS/BS、BFR、MAR呈正相關(guān)關(guān)系,而與牙槽骨MLT呈負相關(guān)關(guān)系;血糖、血清TG、TC、TRACP與牙槽骨MS/BS、BFR、MAR呈負相關(guān)關(guān)系,而與牙槽骨MLT呈正相關(guān)關(guān)系。T2DM♂,血清OCN、IGF-1與牙槽骨MAR呈正相關(guān)關(guān)系;血糖、血清TG、TC、TRACP與牙槽骨MAR呈負相關(guān)關(guān)系。 ②T1DM(N),血清Ca、OCN、TC、IGF-1與牙槽骨MS/BS、BFR、MAR呈正相關(guān)關(guān)系,而與牙槽骨MLT呈負相關(guān)關(guān)系;血清TRACP與牙槽骨MS/BS、BFR、MAR呈負相關(guān)關(guān)系,而與牙槽骨MLT呈正相關(guān)關(guān)系。 結(jié)論 1.本實驗成功建立了1型及2型糖尿病大鼠模型。 2.T2DM雌、雄性大鼠下頜牙槽骨發(fā)生了DOP:T2DM♀＜T2DM♂。 3.T1DM(I)大鼠下頜牙槽骨未發(fā)生DOP,而T1DM(N)大鼠發(fā)生了DOP。 4.DM大鼠下頜牙槽骨骨密度:T2DM♂≈T1DM(I)＞T1DM(N)。 5.T2DM中,N♂大鼠的骨密度:股骨＞下頜牙槽骨＞腰椎;DM♂大鼠的骨密度:下頜牙槽骨≈股骨＞腰椎。 6.兩型糖尿病大鼠牙槽骨骨密度降低均為骨轉(zhuǎn)化失代償狀態(tài):新骨形成＜骨吸收。 7.兩型糖尿病引起的血生化、糖、脂、骨代謝紊亂和骨微結(jié)構(gòu)動態(tài)參數(shù)變化與骨質(zhì)疏松有關(guān),可以作為早期診斷骨質(zhì)疏松的檢測指標(biāo)。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R587.2;R78;R580

【參考文獻】

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本文編號：2819150