骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone morphogenetic proteins, BMPs)屬于轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)超家族的成員。在早期,它因能刺激骨細(xì)胞分化而引起關(guān)注；近年來發(fā)現(xiàn)它在與牙齒發(fā)育有關(guān)的原始口腔上皮中有表達(dá)。在惡性腫瘤,如舌癌的細(xì)胞內(nèi)也可以發(fā)現(xiàn)骨形態(tài)發(fā)生蛋白家族成員的表達(dá),并參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(Bone morphogenetic proteins2, BMP2)是BMPs家族中最有代表性的因子之一,除了具有骨修復(fù)作用外,近年發(fā)現(xiàn)它可以抑制上皮性癌癥特別是舌癌細(xì)胞的生長,BMP信號通路與腫瘤的進(jìn)展有密不可分的關(guān)系。BMP的信號通路是由BMP-BMP受體復(fù)合物(BMP-receptor, BMPR)-SMAD這三部分組成,BMPR是BMP信號通路的重要組成部分,分為BMPR-Ⅰ(包括BMR-ⅠA、BMPR-ⅠB)(?)BMPR-Ⅱ三種。當(dāng)BMP受體表達(dá)受到抑制時就會在一定程度上阻斷BMP的信號通路,從而抑制細(xì)胞的生長分化。 腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在宿主抵抗微生物入侵和抑制腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的防御系統(tǒng)中起著關(guān)鍵作用,它參與多種生物和病理活性的過程。本研究通過觀察不同濃度的TNF-α對經(jīng)rhBMP2處理后舌癌細(xì)胞的生物學(xué)行為的變化；同時檢測對細(xì)胞內(nèi)Smad4和BMP2相關(guān)受體BMPR-ⅠA, BMPR-IB和BMPR-Ⅱ蛋白含量的影響來研究BMP-SMAD通路在舌癌細(xì)胞中的作用機(jī)制,進(jìn)一步探討TNF-α和rhBMP2在體外抗腫瘤活性以及抑制口腔內(nèi)癌癥生長的可行性。 目的：觀察TNF-α對經(jīng)過rhBMP2處理后的舌癌細(xì)胞增殖活性的影響,同時研究它們對與舌癌的發(fā)生,發(fā)展密切相關(guān)的BMP信號通路Smad4及受體蛋白BMPR-ⅠA,BMPR-ⅠB和BMPR-Ⅱ表達(dá)的影響。 方法： 1.舌癌細(xì)胞的培養(yǎng)及增殖活性的變化：復(fù)蘇舌癌Tca8113及CAL27細(xì)胞系,使用RPMI1640高糖培養(yǎng)基體外培養(yǎng),每天觀察細(xì)胞的形態(tài)及增殖活性。MTT法分別檢測]NF-α對舌癌細(xì)胞和rhBMP2蛋白對舌癌細(xì)胞增殖活性的影響。 2.RT-PCR法檢測]TNF-α對舌癌細(xì)胞和經(jīng)rhBMP2蛋白處理后的舌癌細(xì)胞內(nèi)BMP信號通路和受體表達(dá)的影響。 3.將不同濃度的(?)TNF-α加入經(jīng)rhBMP2蛋白處理的培養(yǎng)基內(nèi),Western blot法檢測不同濃度TNF-α對細(xì)胞BMP受體BMPR-IA,BMPR-IB, BMPR-Ⅱ以及信號通路Smad4的表達(dá)改變。 結(jié)果： 1.舌癌細(xì)胞系Tca8113及CAL27細(xì)胞生長穩(wěn)定,形態(tài)正常,細(xì)胞增殖較快,約于第48h進(jìn)入對數(shù)生長期,第72h進(jìn)入平臺期。 2.MTT結(jié)果表明TNF-α可以抑制舌癌細(xì)胞的生長,(?)TNF-α作用于經(jīng)過rhBMP2處理的舌癌細(xì)胞后,細(xì)胞的增殖活性有更明顯降低。 3.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比,TNF-α可以誘導(dǎo)Smad4, BMPR-IA和BMPR-Ⅱ mRNA的表達(dá),TNF-α+rhBMP2可以更進(jìn)一步升高Smad4,BMPR-IA, BMPR-IB mRNA和BMPR-Ⅱ mRNA的表達(dá)。 4.Western blot檢測證明,經(jīng)過TNF-α可以提高舌癌細(xì)胞內(nèi)BMP2相關(guān)蛋白Smad4,BMPR-IA, BMPR-IB和BMPR-Ⅱ蛋白的表達(dá),與TNF-α組相比,TNF-α+rhBMP2組可以更進(jìn)一步提高Smad4, BMPR-IA, BMPR-IB和BMPR-Ⅱ蛋白的表達(dá)。 結(jié)論： 1.rhBMP2和(?)TNF-α對舌癌細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)無明顯影響變化。 2.TNF-a可以抑制舌癌細(xì)胞的增殖,將TNF-a和rhBMP2共同作用于舌癌細(xì)胞后,TNF-α+rhBMP2組對舌癌細(xì)胞增殖抑制的能力比TNF-α組更顯著。 3.TNF-α作用于經(jīng)過(?)hBMP2處理的舌癌細(xì)胞后,有關(guān)Smad4信號通路蛋白,BMPR-IA, BMPR-IB和BMPR-II蛋白及其這些蛋白mRNA的表達(dá)有顯著提高。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R739.86

【參考文獻(xiàn)】

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1 鄧廉夫,馮偉,張s

本文編號：2809523