【摘要】： 目的:本研究觀察黃癸素聯(lián)合用藥的體內和體外抗腫瘤作用;黃癸素抗腫瘤轉移作用及其機制;黃癸素對化學誘導的倉鼠頰癌的防治作用。 方法:(1)應用MTT法檢測黃癸素聯(lián)合臨床常用藥對體外培養(yǎng)腫瘤細胞增殖的抑制作用。(2)應用小鼠移植性實體瘤H22、S180的治療試驗觀察黃癸素聯(lián)合5-FU的體內抗腫瘤活性。(3)通過瓊脂糖凝膠電泳法測定黃癸素對SW480細胞DNA拓撲異構酶活性的影響。(4)細胞-基質粘附實驗檢測黃癸素對B16細胞粘附能力的影響。(5)劃痕實驗檢測黃癸素對B16細胞遷移能力的影響。(6)應用Transwell小室重建基底膜侵襲實驗分析黃癸素對B16細胞趨化能力的影響。(7)免疫S-P法測定黃癸素對腫瘤細胞轉移相關因子CD44V6表達的影響。(8)明膠酶譜法測定黃癸素對腫瘤細胞分泌基質金屬酶MMP-2、MMP-9表達和活性的影響。(9)黃癸素對B16細胞C57BL/6小鼠實驗性肺轉移的影響。(10)黃癸素對H22細胞小鼠實驗性肺轉移的影響。(11)建立DMBA誘導的倉鼠頰囊癌變的動物模型,于6周、9周和12周系統(tǒng)觀察黃癸素治療組和對照組的局部病變情況,實驗結束進行病理學檢查。 結果: 一、黃癸素聯(lián)合用藥的抗腫瘤療效及相關機制 黃癸素聯(lián)用羥喜樹堿對SGC-7901、SW116、HepG2、SW480細胞具有顯著的協(xié)同抑制作用,與5-FU聯(lián)用對MGC-803、SGC-7901、SW116細胞具有協(xié)同抑制作用;與5-FU合用可顯著抑制小鼠H22、S180實體瘤的在體生長;黃癸素對拓撲異構酶都Ⅰ、Ⅱ的活性均有抑制作用。 二、黃癸素抗腫瘤轉移作用及其機制初探 黃癸素可抑制B16細胞與基質及內皮細胞的粘附,抑制作用呈濃度依賴性。劃痕實驗中,在原始致傷區(qū)的基礎上,用藥組細胞在Fn上的遷移均受到明顯抑制。Transwell小室,藥物與細胞作用48h后,細胞穿越基底膜的能力顯著低于對照組,細胞侵襲數(shù)與藥物濃度成反比。通過黃癸素作用的腫瘤細胞培養(yǎng)上清所表達的MMP-2、MMP-9活性較對照組有顯著的降低。在體試驗顯示黃癸素有一定程度抑制C57BL/6小鼠黑色素瘤肺轉移、小鼠H22肝癌肺轉移的作用。 三、黃癸素對化學誘導倉鼠頰癌的抑制作用 黃癸素36、54、72mg/kg分別作用于DMBA誘導的倉鼠,第9周開始高劑量即有抑制病變發(fā)生的作用,第12周病理檢查見其頰粘膜的不典型增生發(fā)生率、鱗癌發(fā)生率均有不同程度降低,54、72mg/kg組倉鼠頰粘膜的不良增生總發(fā)生率分別為66.6%、53.3%,比模型組(86.6%)分別降低了20%和33.3%。 結論:黃癸素與5-FU、羥喜樹堿對體外培養(yǎng)的多種腫瘤細胞具有協(xié)同抑制作用,可能與其對拓撲異構酶都Ⅰ、Ⅱ活性的抑制作用有關。在體試驗表明黃癸素與5-FU合用可顯著抑制小鼠H22、S180實體瘤的在體生長。細胞試驗顯示黃癸素可降低B16細胞的粘附、侵襲和遷移能力。在體試驗顯示黃癸素可抑制B16黑色素腫瘤和H22肝癌的肺轉移。黃癸素對化學誘導倉鼠頰癌有抑制作用。
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R285.5;R739.8
【圖文】：

聯(lián)合黃癸素中高劑量治療組與 5-FU 組比較瘤細胞密度降低，同時有炎性細胞浸潤，以淋巴細胞及粒細胞多見巴細胞及粒細胞多見（圖 1.1）。圖1.1 黃癸素聯(lián)用5-FU對小鼠腫瘤H22的影響——各組腫瘤組織學觀察（HE，10×40 ）。A：生理鹽水組；B：25mg/kg 5-FU；C：90mg/kg 黃癸素；D：90mg/kg黃癸素聯(lián)用25mg/kg5-FU2.4 黃癸素聯(lián)用 5-FU 對小鼠移植性腫瘤 S180 的作用小鼠 S180 移植瘤試驗結果顯示，黃癸素聯(lián)用 5-FU 對腫瘤增長的抑制率高于單用等劑量黃癸素（P<0. 01）和 5-FU，表現(xiàn)為相加或協(xié)同效果，并與黃癸素和 5-FU 均有劑量依賴關系（表 1.8）。同時發(fā)現(xiàn)，各組動物的體重增長與對照組比較均有減緩，但黃癸素組較 5-FU 組和二藥聯(lián)用組更輕（P<0. 01），而聯(lián)合用與5-FU組相比沒有顯著性差異，可見體重增長減緩的主要原因可能來自于5-FU。A BC D16

注：與生理鹽水對照組比較，*表示P<0.05，**表示P<0.01▲：與等劑量HB組比較，P<0.05，▲▲：與等劑量HB組比較，P<0.01癸素對 DNA 拓撲異構酶的影響黃癸素對 DNA 拓撲異構酶Ⅰ活性的影響pBR322DNA 為超螺旋 DNA（下圖第一泳道），當拓撲異構酶作用322DNA，其僅有缺口和線性 DNA（第二泳道），當黃癸素 2mg/L(如第 TopoⅠ已有明顯抑制作用，缺口和線性 DNA 減少，超螺旋 DNA 增多濃度提高，超螺旋 DNA 增多、缺口和線性 DNA 減少更明顯。pBR322 pBR322 pBR322 pBR32 pBR32 pBR322 pBR322+酶 +酶+HGS +酶+HGS +酶+HGS2 +酶+HGS2 羥喜樹堿1mg/L 2mg/l 4mg/L 8mg/LHB 90/5-FU 30 2.4±1.6**▲▲0.715±0.556**▲▲72.03

圖 1.3 黃癸素對 DNA 拓撲異構酶Ⅱ活性的影響討 論黃癸素的先導化合物鹽酸小檗堿已有研究證明其具有抑制多種腫瘤細胞生誘導分化和凋亡的作用。但是鹽酸小檗堿口服難吸收，靜脈注射副作用多，消化道抗生素應用有其優(yōu)勢，但是生物利用度低，難以通過口服給藥發(fā)揮全作用如抗腫瘤等作用，成為阻礙小檗堿擴大臨床應用的瓶頸所在。黃癸素是堿魚腥草素離子對化合物，其生物利用度提高，且本室的前期研究顯示其同有顯著的體內外抗腫瘤作用，具有深入研究的價值空間。聯(lián)合化療是利用聯(lián)用藥物之間的協(xié)同作用取得比單藥更好的效果。聯(lián)合用藥藥物對腫瘤細胞的打擊面增寬，同時減少了耐藥性的發(fā)生，減輕藥物的毒性。的是，幾種藥物聯(lián)合之后，若存在協(xié)同作用，將有利于總療效的提高。因此

【參考文獻】

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1 ;Deficiency of Mouse CD4~+CD25~+Foxp3~+ Regulatory T Cells in Xenogeneic Pig Thymus-Grafted Nude Mice Suffering from Autoimmune Diseases[J];Cellular & Molecular Immunology;2008年05期

2 白紀剛;呂毅;王浩華;;倉鼠胰腺癌原位模型的建立及生物學特性[J];第四軍醫(yī)大學學報;2005年24期

3 夏娟,李秉琦,何園;歐洲及美國口腔黏膜病學研究進展——第一次歐美口腔黏膜病協(xié)會聯(lián)合會議學術報告概要[J];臨床口腔醫(yī)學雜志;2002年03期

4 毛庭枝;周巧靈;梁榮感;戴支凱;羅偉生;肖勝軍;徐慶;;倉鼠胰腺癌細胞株移植性肝癌模型的建立及其生物學特性[J];世界華人消化雜志;2009年18期

5 劉德純,黨誠學,白紀綱,陳武科,王作仁;硫酸昆布多糖在倉鼠胰腺癌肝轉移模型中抑制作用的研究[J];中華肝膽外科雜志;2004年12期

6 顏春洪,韓銳;Genistein抑制HT1080人纖維肉瘤細胞的體外侵襲作用[J];中華腫瘤雜志;1999年03期

7 劉文泰,李麗華;免疫耐受敘利亞倉鼠人胃癌異種移植模型的免疫耐受檢測[J];中國免疫學雜志;2004年01期

8 婁金麗,邱全瑛,林洪生,祁鑫,裴迎霞,何秀娟;小檗堿對人胃癌細胞增殖、細胞周期及CD44V6表達的影響[J];中國免疫學雜志;2004年05期

9 Tomomichi Iwaki;Kaoru Ishizaki;Shuji Kinoshita;Hideki Tanaka;Atsushi Fukunari;Makoto Tsurufuji;Teruaki Imada;;Protective effects of ursodeoxycholic acid on chenodeoxycholic acid-induced liver injury in hamsters[J];World Journal of Gastroenterology;2007年37期

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1 曾倩;免疫耐受敘利亞倉鼠人胃癌異種移植模型傳代研究[D];河北醫(yī)科大學;2006年

本文編號：2806180