【摘要】： 目的：研究B7-H3基因體內增強特異性抗口腔腫瘤免疫作用。 方法：構建人B7-H3基因腺病毒表達載體,采用人免疫重建荷人口腔鱗癌SCID小鼠嵌合模型,模型動物隨機分為四組,每組6只：對照組(Ⅰ組)、B7-H3組(Ⅱ組)、空載體組(Ⅲ組)、非免疫重建組(Ⅳ組),瘤體內分別注射人B7-H3基因腺病毒表達載體(Ⅱ組)、未轉染任何基因的腺病毒表達載體(Ⅲ組)和等體積PBS (Ⅰ、Ⅳ組),記錄小鼠成瘤潛伏期；每周定期用游標卡尺檢測腫瘤生長速率；于第4、7周分別尾靜脈取血,ELISA檢測人IgG含量,評估小鼠免疫重建是否成功；九周后處死模型動物,RT-PCR、免疫熒光顯微鏡檢測腫瘤組織人B7-H3mRNA蛋白表達；流式細胞儀檢測SCID鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞；比較各組小鼠脾臟重量；取小鼠脾臟組織行CD3免疫組化染色驗證人源T細胞。 結果：1.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組小鼠成瘤潛伏期分別為11.91+0.98、10.49±1.39、10.21+0.747.89±1.30天,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組較Ⅳ組明顯延長。2.第4、7周檢測Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組小鼠外周血人IgG含量分別為30.37±2.15、189.65±15.10；36.51±1.45、168.97±13.01；41.88±9.26、179.46±17.67μg/ml;第Ⅳ組未檢測到IgG含量。Ⅱ組小鼠脾臟人CD3分子免疫組化結果陽性,其它組未測得。3.熒光顯微鏡觀察B7-H3組小鼠腫瘤組織可見大量綠色熒光,RT-PCR檢測到人B7-H3 mRNA表達,其余各組均未檢測到B7-H3表達。4.Ⅱ組小鼠腫瘤體積(1560.76±45.87mm3),小于其它組(Ⅰ組3708.64±188.97,Ⅲ組3988.65±196.98,Ⅳ組6800.20±451.34)(P0.05),生長明顯受到抑制。5.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組均能檢測到人CD4+、CD8+T淋巴細胞,Ⅱ組CD4+、CD8+T淋巴細胞比率分別為18.5±1.4、21.6±1.0(%),顯著高于Ⅰ(14.5±2.1、13.8±0.5)、Ⅲ(15.8±2.26、13.4±1.7)組(P0.05)。6.Ⅱ組小鼠脾重大于其它組(P0.05)。 結論：人免疫重建荷人口腔鱗癌SCID小鼠嵌合模型構建成功；在整體水平顯示,人B7-H3基因在腫瘤組織的表達增強能成功誘導CD4+、CD8+T淋巴細胞增殖,產生有效的特異性抗腫瘤免疫應答。
【學位授予單位】：汕頭大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R739.8
【圖文】：

I、11、111組小鼠在第4、7周外周血中均可檢測到人IgG，分別為30.37士2.15、189.65士15.10;36.51士1.45、165.97士一3.01;41.55士9.26、179.46士17.67林g/ml;第IV組沒有檢測到IgG含量(表1)。免疫重建組小鼠脾臟免疫組化結果提示人CD3表達陽性(圖1)。3.2人B7一H3基因在腫瘤組織中的表達B7一H3組(11組)，熒光顯微鏡下觀察到腫瘤組織表達大量綠色熒光(圖2)。RT一PCR檢測到人B7一H3mRNA表達(圖3)，其余各組均未檢測到B7一H3表達。提示B7一H3腺病毒表達載體感染成功，在腫瘤組織中能穩(wěn)定表達。3.3人B7-H3基因表達對SCID鼠成瘤潛伏期和腫瘤大小的影響小鼠在9周內無死亡，未出現(xiàn)明顯的行為及生活習性改變，也沒有皮疹、腹瀉發(fā)生，主要臟器組織檢查無明顯GVHD。成瘤率均為100%，PBS對照組(IV組)成瘤潛伏期為7一9天，免疫重建三組為H一14天，潛伏期明顯延長(P<0.01)

I組111組IV組11組圖7各組小鼠脾臟解剖，n組脾臟受到刺激增長thesPleensseParatedfromSCID而eebearinghIJmanoralsquamousfromInieeof11grouPweremorebiggerinvolumethanothergouPs.鼠外周血中人cD4十、cDS+T淋巴細胞比率(%)檢測結果(n=6)14.5士2.113.8士0.518.5士1.421.6士1.0*I巧.8士2.2613.4士1.70.000.00

4.2人B7一H3在腫瘤組織中的表達:B7一H3組(II組)，熒光顯微鏡下觀察到腫瘤達大量綠色熒光(圖l)。RT一PCR檢測到人B7一H3mRNA表達(圖2)，其余各組均未B7一H3表達。提示B7一H3腺病毒表達載體感染成功，在腫瘤組織中能穩(wěn)定表達。

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4 陳Z

本文編號：2796689