【摘要】：[目的] 本課題通過體外實驗研究富血小板纖維蛋白提取液(Platelet-rich fibrin extract, PRFe)對成骨細胞增殖、分化、成骨及細胞骨架的影響,探討富血小板纖維蛋白對成骨細胞的作用,以期為富血小板纖維蛋白在臨床的應用提供理論基礎(chǔ)。 [方法] 1、PRFe制備：健康雄性SD大鼠,腹主動脈取血10ml,離心后制取富血小板纖維蛋白(PRF),冷凍后再次離心制取PRFeo 2、鈦片制備：將直徑為10mm、厚度為lmm的TA2純鈦鈦片進行酸蝕噴砂(SLA)處理。 3、分組：實驗分為實驗組(P組)和對照組(D)組,P組使用含PRFe的α-MEM培養(yǎng)液(10%FBS)培養(yǎng)細胞,D組則使用不含PRFe的α-MEM培養(yǎng)液(10%FBS)。 4、觀察指標：(1)甲基噻唑基四唑(MTT)法測定1d,3d,5d的細胞增殖數(shù)；(2)堿性磷酸酶(ALP)活性檢測1d,3d,5d,7d的細胞分泌堿性磷酸酶活性情況；(3)茜素紅染色觀察14d,21d細胞分泌鈣結(jié)節(jié)的情況；(4)激光共聚焦顯微鏡觀察培養(yǎng)后3h、6h、9h、12h的細胞骨架形態(tài)；(5)熒光實時定量PCR測定CbfalmRNA和OCN mRNA基因分別在3d、7d的表達；(6)掃描電子顯微鏡觀察細胞接種于噴砂酸蝕鈦片后1d、3d、5d的細胞伸展狀況。 [結(jié)果] 1、MTT檢測細胞增殖：隨培養(yǎng)時間延長,細胞數(shù)量逐漸增加,在各時間點,P組細胞的吸光度值均明顯高于D組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2、ALP活性檢測：隨著培養(yǎng)時間延長而增加,P組的增加更為顯著,在各時間點,P組的吸光度值均顯著大于D組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 3、茜素紅染色：隨培養(yǎng)時間延長,細胞分泌的鈣結(jié)節(jié)逐漸增多,P組細胞分泌的鈣結(jié)節(jié)的積分光密度值較D組明顯增加,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4、激光共聚焦觀察細胞骨架：隨時間延長,細胞骨架從圓形逐漸向梭形、不規(guī)則多角形變化,肌動蛋白從網(wǎng)狀排列逐漸拉長、互相平行排列,并橫跨整個細胞；在各時間點,P組細胞骨架較D組更加伸展。 5、熒光實時定量PCR檢測成骨基因表達：隨著培養(yǎng)時間延長,兩組細胞的基因表達量逐漸增加,將D組3d時基因表達水平定義為1,進行組內(nèi)標準化,P組細胞的Cbfal和OCN基因表達量顯著高于D組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 6、掃描電鏡觀察細胞形態(tài)：隨時間延長,細胞由較短的偽足逐漸變長變寬,數(shù)目也隨之增多相互交織成網(wǎng)狀,將細胞牢固的固定于鈦片表面,在各時間點,P組細胞較D組細胞,在鈦片表面有更好的排列伸展。 [結(jié)論] 1、PRF所釋放的多種生長因子能有效的促進細胞的增殖、分化。 2、PP,F能促進細胞骨架的排列伸展,提高細胞在鈦片表面的黏附力。
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R783.6

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王麗萍;張樹標;范長斌;方穎;;牙周炎及吸煙對種植體周圍邊緣骨吸收的影響[J];中華口腔醫(yī)學研究雜志(電子版);2010年02期

本文編號：2781252