【摘要】：背景和目的 咬合創(chuàng)傷是指個別牙所受的咬合力大小超過其牙周組織的耐受力,造成牙周組織損傷的情況,在口腔科就診的患者中廣泛存在。牙槽骨是體內(nèi)具有高度可塑性的一種骨組織,成為研究骨信號通路時的首選體內(nèi)骨。咬合創(chuàng)傷機(jī)制的研究前提是能夠有效地建立咬合創(chuàng)傷動物模型,咬合面粘結(jié)復(fù)合樹脂升高咬合是一種損傷小、效果肯定的方法。MMP-9是一種糖化蛋白酶,已有研究證實(shí)其在骨吸收過程中由破骨細(xì)胞分泌產(chǎn)生,可以用來檢測骨吸收的進(jìn)程。 細(xì)胞間通訊在骨改建的過程中起到十分重要的作用,它使得骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞之間的信息能夠高度精確和高效地傳遞到效應(yīng)細(xì)胞上與相應(yīng)的受體相互作用,發(fā)生一系列變化。細(xì)胞間通訊有直接接觸型、直接聯(lián)系型和間接聯(lián)系型三種方式�；蛐酒夹g(shù)可以準(zhǔn)確、靈敏的檢測、分析雜交信號,當(dāng)前廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、基因組學(xué)研究等領(lǐng)域。本實(shí)驗(yàn)采用的大鼠Roche-Nimble Gen全基因組表達(dá)譜芯片具有高密度、高通量等特點(diǎn),能夠同步分析26419個基因的表達(dá)狀況。 鑒于目前咬合創(chuàng)傷早期細(xì)胞間通訊的表達(dá)狀況的相關(guān)文獻(xiàn)報道較少,骨改建中細(xì)胞間通訊的具體機(jī)制尚不清楚,本實(shí)驗(yàn)采用復(fù)合樹脂粘結(jié)方絲法建立大鼠咬合創(chuàng)傷模型后,利用MMP-9檢測其牙槽骨內(nèi)骨吸收進(jìn)程；并對咬合創(chuàng)傷24小時的大鼠牙槽骨內(nèi)的細(xì)胞間通訊利用全基因組表達(dá)譜芯片進(jìn)行分析,以期為進(jìn)一步闡明骨改建信號通路分子機(jī)制、臨床預(yù)防和治療骨疾病提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 材料和方法 1.大鼠咬合創(chuàng)傷模型的建立及牙槽骨中MMP-9的表達(dá) 在大鼠右側(cè)上頜第一磨牙(?)面使用復(fù)合樹脂粘結(jié)方絲,抬高咬合1mm,以形成右側(cè)下頜第一磨牙的咬合創(chuàng)傷。截取右側(cè)下頜磨牙區(qū)牙槽骨,制作脫鈣骨組織切片,采用免疫組織化學(xué)的方法觀察咬合創(chuàng)傷1天、3天、7天、14天時,MMP-9在大鼠第一磨牙根周區(qū)牙槽骨內(nèi)的表達(dá)情況。 2.大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨細(xì)胞間通訊狀況研究 在大鼠咬合創(chuàng)傷24小時后,截取其以第一磨牙近遠(yuǎn)中徑為界的下頜骨組織,Trizol法提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄為cDNA并使用探針標(biāo)記,進(jìn)行基因芯片的雜交,對結(jié)果進(jìn)行Pathway和GO分析,并選取三個差異顯著因子進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證芯片結(jié)果的可靠性。 結(jié)果 1.大鼠咬合創(chuàng)傷模型的建立及牙槽骨中MMP-9的表達(dá) 形態(tài)學(xué)觀測顯示咬合創(chuàng)傷14天時出現(xiàn)明顯的形態(tài)學(xué)改變：X線根尖片中根尖區(qū)牙周膜增寬；HE染色見破骨細(xì)胞及骨陷窩的形成。免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示：咬合升高3天時大鼠根周牙槽骨中MMP-9陽性染色細(xì)胞明顯增多,且與對照組比有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),隨著咬合創(chuàng)傷時間延長,陽性細(xì)胞的百分比逐漸增大。 2.大鼠咬合創(chuàng)傷早期牙槽骨細(xì)胞間通訊狀況研究 基因芯片雜交結(jié)果顯示咬合創(chuàng)傷24h時,實(shí)驗(yàn)側(cè)與對照側(cè)相比出現(xiàn)顯著表達(dá)差異的基因有586個,涉及106個不同的骨信號通路。其中與細(xì)胞間通訊相關(guān)的通路涉及到細(xì)胞間粘附分子、粘著連接、縫隙連接、焦點(diǎn)粘連以及緊密連接通路 等。各通路中的主要因子明顯下調(diào),細(xì)胞間通訊普遍受到抑制。 結(jié)論 1)咬合面復(fù)合樹脂粘結(jié)方絲升高咬合1mm的方法建立的咬合創(chuàng)傷大鼠動物模型能夠引起骨改建,是確實(shí)有效的；咬合創(chuàng)傷后24小時研究骨改建早期信號通路狀況是可行的。 2)在咬合創(chuàng)傷24h時,骨相關(guān)信號通路中的細(xì)胞間粘附分子、粘著連接、縫隙連接、焦點(diǎn)粘連以及緊密連接等細(xì)胞間信息傳遞通路普遍受到抑制。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R782

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2771317