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白念珠菌感染KB細(xì)胞的IL-6mRNA及蛋白表達的實驗研究

發(fā)布時間:2020-07-08 15:07
【摘要】:目的:通過體外實驗觀察白念珠菌與KB細(xì)胞的黏附情況,探討白念珠菌對口腔上皮細(xì)胞的黏附作用和影響因素,進一步分析白念珠菌的致病機制;應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)分別檢測白細(xì)胞介素-6(IL-6)在KB細(xì)胞中的蛋白和mRNA表達以及白念珠菌感染后對其表達的影響,探討IL-6在口腔上皮細(xì)胞早期防御白念珠菌感染中的可能作用。 方法:以口腔鱗癌細(xì)胞系KB細(xì)胞為研究對象,觀察白念珠菌感染KB細(xì)胞后,在不同的時間,白念珠菌的黏附總數(shù)、活力、及菌絲轉(zhuǎn)換情況;分別以白念珠菌的菌絲相、孢子相和滅活的白念珠菌感染KB細(xì)胞,以單獨培養(yǎng)的KB細(xì)胞作為對照組,分別在6h、12h、24h提取培養(yǎng)上清液,ELISA法檢測上清液中IL-6的蛋白含量;RT-PCR法檢測白念珠菌感染KB細(xì)胞后在24h時IL-6mRNA表達水平。 結(jié)果:1.白念珠菌感染KB細(xì)胞后發(fā)生細(xì)胞黏附,24h內(nèi),隨著時間的推移,被黏附的KB細(xì)胞數(shù)逐漸增多,孢子相和菌絲相白念珠菌均可黏附KB細(xì)胞。2.白念珠菌黏附KB細(xì)胞后,念珠菌仍保持其活性,但是隨著時間的推移,游離態(tài)念珠菌的總數(shù)逐漸減少,從感染3小時后的1.5×105candida cells/cm~2減少到24小時后的8×103candida cells/cm~2。3.白念珠菌感染KB細(xì)胞后,其形態(tài)從孢子相逐漸向菌絲相進行轉(zhuǎn)換。并且隨著時間的推移,菌絲的轉(zhuǎn)換率逐漸升高,由3小時后的23.1%升高到24小時后的82.2%。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.白念珠菌感染KB細(xì)胞后表達IL-6的蛋白含量隨時間的增加而增加,12h達到高峰,隨后出現(xiàn)下降趨勢,白念珠菌孢子相和菌絲相感染KB細(xì)胞后IL-6的蛋白表達含量與對照組比較,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。5. RT-PCR成像分析系統(tǒng)顯示,孢子相和菌絲相白念珠菌黏附KB細(xì)胞后均可使IL-6mRNA的表達增加而且顯著高于對照組,P0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論:1.白念珠菌感染KB細(xì)胞后,被黏附的KB細(xì)胞數(shù)與游離態(tài)白念珠菌的總數(shù)均具有時間依賴性。白念珠菌的菌絲轉(zhuǎn)換率與時間呈正相關(guān)。2.白念珠菌感染KB細(xì)胞后IL-6的蛋白表達上調(diào),且表達的含量與時間具有依賴關(guān)系。3.白念珠菌感染KB細(xì)胞后IL-6的mRNA表達上調(diào),提示上皮細(xì)胞可能參與白念珠菌的免疫反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】:大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類號】:R780.2
【圖文】:

KB細(xì)胞,白念珠菌


取5μl PCR產(chǎn)物與1μl上樣液,混勻后加入2%瓊脂糖凝膠加樣孔中,以DL1000作為相對分子質(zhì)量Marker,電壓為80 v,電泳約40分鐘,取出凝膠置于凝膠成像分析儀中成像,用Gel-Pro analyze做條帶灰度分析,以IL-6mRNA與GAPDH mRNA條帶灰度比值來檢測樣本中IL-6mRNA的相對表達量。(六)結(jié)果統(tǒng)計分析所得數(shù)據(jù)用 ±S 表示,經(jīng) SPSS11.5 軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。采用單因素方差分析,P<0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié) 果一.白念珠菌與 KB 細(xì)胞的黏附(一)白念珠菌黏附 KB 細(xì)胞的顯微鏡下觀察正常的 KB 細(xì)胞是扁平的多角形,在胞質(zhì)靠近中央處有圓形的細(xì)胞核,各個細(xì)胞間緊密相連,彼此互相銜接,呈現(xiàn)“鋪路石”狀。4. PCR產(chǎn)物半定量分析

KB細(xì)胞,念珠菌,革蘭氏染色,倒置顯微鏡


取5μl PCR產(chǎn)物與1μl上樣液,混勻后加入2%瓊脂糖凝膠加樣孔中,以DL1000作為相對分子質(zhì)量Marker,電壓為80 v,電泳約40分鐘,取出凝膠置于凝膠成像分析儀中成像,用Gel-Pro analyze做條帶灰度分析,以IL-6mRNA與GAPDH mRNA條帶灰度比值來檢測樣本中IL-6mRNA的相對表達量。(六)結(jié)果統(tǒng)計分析所得數(shù)據(jù)用 ±S 表示,經(jīng) SPSS11.5 軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理。采用單因素方差分析,P<0.05,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié) 果一.白念珠菌與 KB 細(xì)胞的黏附(一)白念珠菌黏附 KB 細(xì)胞的顯微鏡下觀察正常的 KB 細(xì)胞是扁平的多角形,在胞質(zhì)靠近中央處有圓形的細(xì)胞核,各個細(xì)胞間緊密相連,彼此互相銜接,呈現(xiàn)“鋪路石”狀。4. PCR產(chǎn)物半定量分析

白念珠菌,孢子,細(xì)胞


一.白念珠菌與 KB 細(xì)胞的黏附(一)白念珠菌黏附 KB 細(xì)胞的顯微鏡下觀察正常的 KB 細(xì)胞是扁平的多角形,在胞質(zhì)靠近中央處有圓形的細(xì)胞核,各個細(xì)胞間緊密相連,彼此互相銜接,呈現(xiàn)“鋪路石”狀。圖 1 正常貼壁生長的 KB 細(xì)胞 圖 2 孢子相白念珠菌黏附 KB 細(xì)胞(倒置顯微鏡 40×) (革蘭氏染色 100×)

【參考文獻】

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本文編號:2746697

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