【摘要】：腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)是涎腺最常見的惡性腫瘤之一,常好發(fā)于小涎腺。該腫瘤起病隱蔽,生長緩慢,侵襲性強,易復發(fā)、易早期轉移,且對常規(guī)的化療、放療等治療措施不敏感,因其有沿著周圍組織的神經(jīng)血管潛行性生長的特點,而確切定位神經(jīng)受侵部位尚無客觀手段,從而給臨床手術完全切除腫瘤帶來較大困難。切除范圍不足時,術后易復發(fā);而盲目擴大切除,必然給患者帶來不必要的畸形和功能障礙。因而綜合治療效果和遠期療效均不理想。隨著基因治療的興起,深入研究涎腺腺樣囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,sacc)的生物學特性,從基因和蛋白水平來探討SACC的發(fā)生機制,尋找與SACC的發(fā)生、發(fā)展和預后相關的生物學標記成為國內外研究的熱點,基因治療也成為未來最具潛力的有效根治SACC的方法。 IBP(IRF-4 binding protein, IRF-4結合蛋白)是一種主要表達于T淋巴細胞并具有重要功能的蛋白質。它參與TCR信號刺激下T細胞免疫突觸的形成;與Th2細胞的分化密切相關;通過抑制IRF-4的轉錄因子活性調控介素17與介素21的產(chǎn)生,影響Th17細胞的功能;影響MAPKs與NF-κB參與TLRs傳導通路;在維持免疫內環(huán)境的穩(wěn)定中發(fā)揮重要作用。IBP knockout小鼠表現(xiàn)為自身免疫免疫性疾病的癥狀。另外,IBP具有GEF(鳥苷酸交換因子)的作用,能夠激活Rho GTPase家族的部分成員。以上這些研究結果均提示IBP可以參與細胞骨架的重構、細胞極化、細胞間的信息傳遞等多種重要的生理過程。近來有學者發(fā)現(xiàn)IBP在結腸癌及乳腺癌中高表達并起著重要的作用。但IBP在SACC中的表達及功能還未見報道。本課題首次以SACC為研究對象,對IBP在SACC和正常涎腺中的表達及其可能的臨床意義進行研究,并建立了穩(wěn)定高表達IBP的SACC細胞株,通過體外試驗證實IBP在SACC中的功能及其可能的機制。 主要研究內容和結果: 一、IBP在SACC和正常涎腺中的表達及其臨床意義的研究 1、利用ACC2、ACCM等2株SACC細胞株通過Western Blot技術檢測IBP的表達情況;結果顯示:IBP在ACC2、ACCM細胞株中均陰性表達。 2、收集了27例SACC石蠟標本和20例正常涎腺組織標本,通過免疫組化染色對IBP在臨床樣本中的表達情況進行分析,并將其與臨床樣本的其它病理學指標進行統(tǒng)計學分析確定其臨床意義;結果表明:27例SACC中僅3例IBP基因表達弱陽性,20例正常涎腺組織中則全部表達陽性,兩組間存在顯著性差異(P0.05)。而IBP的表達與患者的年齡、性別及腫瘤部位均無明顯的相關性(P0.05)。 二、IBP在SACC中的功能及其機制的研究 1、利用IBP陰性表達的ACC2細胞,通過質粒轉染構建IBP過表達細胞模型;通過Western Blot檢測證實獲取了穩(wěn)定高表達IBP的ACC2-C1/IBP細胞株。 2、通過MTT法檢測各組細胞增殖情況,確定IBP對細胞增殖的影響;結果表明:IBP抑制SACC細胞的增殖。 3、通過平板克隆形成試驗,檢測IBP對ACC2細胞克隆形成能力的影響;結果證實:IBP能抑制SACC細胞的克隆形成能力。 4、采用Transwell試驗,將穿膜細胞進行染色計數(shù)分析各組細胞侵襲能力的變化,明確IBP對細胞侵襲能力的影響;結果表明:IBP有促進SACC細胞侵襲的作用。 5、通過臨床常用的SACC治療藥物紫杉醇為誘導劑,觀察IBP的表達對SACC細胞耐受紫杉醇殺傷能力的影響;結果提示:IBP在一定程度上還具有紫杉醇抗藥性。 6、利用微管蛋白Tubulin免疫熒光染色,觀察IBP與微管的關系,并觀察紫杉醇作用前后微管的變化;結果表明:IBP與微管有一定程度的共定位,并能促進微管的解聚。 7、通過波形蛋白和角蛋白的免疫熒光染色,初步探討了IBP與EMT的關系;初步證實了IBP能夠促進上皮間質轉化的發(fā)生。 綜上所述, IBP在正常涎腺中存在高表達,在SACC中則低表達甚至不表達;SACC中IBP的表達具有抑制增殖、促進侵襲的作用,并對紫杉醇耐藥,能夠促進上皮間質轉化的發(fā)生。上述研究成果能為臨床SACC的的診斷和治療提供新的靶點及方向,并對臨床化療用藥的選擇具有指導意義。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R739.8
【圖文】：

第三軍醫(yī)大學碩士學位論文水透明：50%乙醇，1min→70%乙醇，1min→90%乙醇，1min→無水乙乙醇，2min→二甲苯/無水乙醇(1：1)，5min→二甲苯，5min→二甲苯封片。BS 代替一抗作為陰性對照。鏡觀察并拍照，采用 χ2檢驗分析 IBP 的表達與 SACC 相關參數(shù)的結 果SACC 細胞株 IBP 表達的 WB 檢測鑒定 ACC2、ACCM 細胞株的 IBP 表達情況，分別提取細胞株 ACC照人白血病細胞株 Jurkat 的總蛋白，利用 Western blot 檢測 IBP 的測，確認 ACC2、ACCM 細胞中未見 IBP 的表達(如圖 1 所示)。

IBP在正常涎腺組織和腺樣囊性癌中的表達(S-P×40)

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本文編號：2739161