【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?齲病是口腔中常見病、多發(fā)病,而變形鏈球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)是目前公認(rèn)的致齲力最強(qiáng)、檢出率最高的致病菌之一。氟化物因?yàn)榧饶芤种蒲荔w硬組織脫礦,促進(jìn)其再礦化,又能抑制變形鏈球菌等致齲菌的生長和代謝,而被廣泛添加到口腔衛(wèi)生產(chǎn)品中。然而,耐氟菌株的出現(xiàn)不僅降低了氟化物的防齲、抗齲作用,也干擾了口腔內(nèi)微生態(tài)系統(tǒng)的正常結(jié)構(gòu)及運(yùn)行。通過對細(xì)菌氟抗性機(jī)制的研究,人們提出變形鏈球菌中存在氟離子逆向運(yùn)輸?shù)鞍譋riCF,屬于F-/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。對氟離子有特異的識別運(yùn)輸功能,將氟離子運(yùn)出到細(xì)菌細(xì)胞外,來減弱氟離子對細(xì)菌的毒副作用。變形鏈球菌中的EriCF蛋白是由兩個串聯(lián)的同源基因編碼產(chǎn)生,在GenBank中基因標(biāo)記為SMU_1289c和SMU_1290c。然而,目前對于氟抗性增強(qiáng)的變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR中關(guān)于氟抗性相關(guān)基因及編碼蛋白的研究尚少。因此,作為一種與齲病發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)的氟抗性相關(guān)蛋白,進(jìn)一步研究變形鏈球菌耐氟菌株中EriCF蛋白的作用和深入探索氟抗性增強(qiáng)的機(jī)制,對于口腔醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究和發(fā)展具有重要的意義。實(shí)驗(yàn)方法:本實(shí)驗(yàn)通過克隆表達(dá)變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR中er.iCF1及eriCF2基因,構(gòu)建重組大腸桿菌,并繪制重組大腸桿菌在不同NaF環(huán)境下的生長曲線,探究變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR中eriCF1及eriCF2基因的差異性表達(dá)與大腸桿菌氟抗性的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1、本實(shí)驗(yàn)成功克隆并表達(dá)了變形鏈球菌耐氟菌株UA159-FR中eriCF1及er.iCF2基因,同時構(gòu)建了含有目的基因的重組大腸桿菌;2、在大腸桿菌crcB基因存在的情況下,eriCF1組和eriCF2組菌株不論在高氟環(huán)境下(3.0 g.L-1,2.5 g.L-1)還是低氟環(huán)境下(2.0 g.L-1,1.5 g.L-1),菌液終濃度及生長速度均高于KZ組(P0.01),且eriCF2組菌液終濃度高于eriCF1組(P0.05);3、與原代大腸桿菌BL21相比,eriCF1和eriCF2的導(dǎo)入不僅都能增強(qiáng)細(xì)菌的氟抗性能力,而且eriCF2的氟抗性能力較eriCF1強(qiáng);實(shí)驗(yàn)結(jié)論:1、變形鏈球菌耐氟菌株中eriCF1和eriCF2基因均與細(xì)菌的抗氟能力有關(guān)。2、來自不同菌屬的氟抗性相關(guān)蛋白可以出現(xiàn)氟抗性疊加效應(yīng)。3、EriCF1與EriCF2蛋白與氟制劑聯(lián)合應(yīng)用可以抑制變形鏈球菌的生長與繁殖。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R780.2
【圖文】：

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第４章結(jié)果逡逑４．１變形鏈球菌耐氟菌株ＵＡ１５９－ＦＲ培養(yǎng)逡逑圖４．邋１變形鏈球菌耐氟菌株ＵＡ１５９－ＦＲ逡逑４．２變形鏈球菌耐氟菌株１６ＳｒＤＮＡ鑒定逡逑４．２．１．１６Ｓ邋ｒＤＮＡ邋測序逡逑以２７Ｆ和１４９２Ｒ為引物，使用ＡＢＩ公司ＤＮＡ測序儀進(jìn)行測序。逡逑相關(guān)引物信息如下：邐逡逑Ｐｒｉｍｅｒ邋Ｎａｍｅ邋Ｐｒｉｍｅｒ邋Ｓｅｑｕｅｎｃｅ邋（５＇—？３＇）逡逑２７Ｆ邐ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＭＴＧＧＣＴＣＡＧ逡逑１４９２Ｒ邐ＴＡＣＧＧＹＴＡＣ

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本文編號：2736198