【摘要】：目的:通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討人尿源性干細(xì)胞促進(jìn)移動(dòng)性牙根吸收修復(fù)的作用。材料方法:體外實(shí)驗(yàn):從6位健康成年男性(年齡:25-27歲之間)尿液中分離人尿源性干細(xì)胞(hUSCs),通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志物和多向分化能力檢測(cè),鑒定人尿源性干細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞特性。將人尿源性干細(xì)胞與成牙骨質(zhì)細(xì)胞株OCCM30以1:1的比例間接共培養(yǎng),進(jìn)行成骨誘導(dǎo),于實(shí)驗(yàn)7天,進(jìn)行堿性磷酸酶活性測(cè)定和染色。于實(shí)驗(yàn)21天,進(jìn)行茜素紅染色。于實(shí)驗(yàn)7天,通過(guò)RT-PCR和Western blot檢測(cè)成牙骨質(zhì)細(xì)胞RUNX2,Osterix,OPN,ALP的基因和蛋白表達(dá)。于實(shí)驗(yàn)1,3,5和7天,CCK-8細(xì)胞增殖活性檢測(cè)成牙骨質(zhì)細(xì)胞株OCCM30的增殖情況。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):選取12只10周齡雄性SD大鼠,對(duì)上頜第一磨牙施加100g的力量使其近中移動(dòng),建立移動(dòng)性牙根吸收模型。加力14天后去除矯治力,分為2組,實(shí)驗(yàn)組6只(于第一磨牙近中前庭溝和頰腭側(cè)粘膜轉(zhuǎn)折處注射10×10~4個(gè)/mL人尿源性干細(xì)胞約1mL,每3天注射1次),對(duì)照組6只(未注射任何藥物),10天后處死大鼠,取下包含第一二磨牙在內(nèi)的牙槽骨骨塊。Micro-CT和HE染色觀察牙根吸收修復(fù)情況以及牙槽骨骨小梁參數(shù)變化,TRAP染色觀察破骨細(xì)胞數(shù)量,免疫組化檢測(cè)OPN,OCN,CAP和MAB1281的表達(dá)。結(jié)果:1、流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示代表間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物的CD90,CD146和CD105呈陽(yáng)性。多向分化能力檢測(cè)發(fā)現(xiàn),人尿源性干細(xì)胞能向成骨細(xì)胞,成脂肪細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞三系分化,說(shuō)明人尿源性干細(xì)胞具有間充質(zhì)干細(xì)胞的特性。2、CCK8檢測(cè)發(fā)現(xiàn)人尿源性干細(xì)胞能顯著促進(jìn)成牙骨質(zhì)細(xì)胞的增殖。3、RT-PCR和Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)人尿源性干細(xì)胞能顯著促進(jìn)成牙骨質(zhì)細(xì)胞RUNX2,Osterix,OPN,ALP基因和蛋白的表達(dá)。4、Micro-CT檢測(cè)發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組牙根吸收陷窩體積顯著小于對(duì)照組(P0.05)。5、骨小梁參數(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)和骨小梁厚度(Tb.Th.)實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P0.05),結(jié)構(gòu)模型指數(shù)(SMI),骨小梁分離度(Tb.Sp.)和骨小梁數(shù)量(Tb.N.)兩組無(wú)差別(P0.05)。6、TRAP染色發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組內(nèi)破骨細(xì)胞數(shù)量少于對(duì)照組。7、免疫組化檢測(cè)發(fā)現(xiàn)OPN,OCN和CAP的表達(dá)實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組,MAB1281在實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)為陽(yáng)性。結(jié)論:人尿源性干細(xì)胞能顯著促進(jìn)成牙骨質(zhì)細(xì)胞的增殖和成骨表達(dá)能力,同時(shí)促進(jìn)大鼠移動(dòng)性牙根吸收的修復(fù)。說(shuō)明人尿源性干細(xì)胞具有促進(jìn)移動(dòng)性牙根吸收修復(fù)的潛力。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R78
【圖文】：

圖 1-1 人尿源性干細(xì)胞的形態(tài)。Figure 1-1 The Morphology of the hUSCs.A：原代 hUSCs，4 天時(shí)細(xì)胞開(kāi)始貼壁（標(biāo)尺：200μm）。B：培養(yǎng) 6 天時(shí)，細(xì)胞呈“集落狀”（標(biāo)尺：200μm）。C：培養(yǎng) 12 天后，細(xì)胞鋪滿整個(gè)孔板，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，纖維細(xì)胞樣形狀（標(biāo)尺：100μm）。D：第 3 代 hUSCs（標(biāo)尺：100μm）。1.10 人尿源性干細(xì)胞（hUSCs）表面標(biāo)志物流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果結(jié)果如圖 1-2 所示。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示代表間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物的CD90，CD105 和 CD146 呈陽(yáng)性，代表造血干細(xì)胞表面標(biāo)志物的 CD31，CD34 和CD45 呈陰性，說(shuō)明 hUSCs 具有間充質(zhì)干細(xì)胞的特性，而非造血干細(xì)胞。

圖 1-2 人尿源性干細(xì)胞表面標(biāo)志物流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果Figure 1-2 The results of the hUSCs surface marker detected by flow cytometer1.11 人尿源性干細(xì)胞（hUSCs）成骨誘導(dǎo)分化結(jié)果結(jié)果如圖 1-3 所示。細(xì)胞在誘導(dǎo) 21 天后，排列較緊密，部分細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則。實(shí)驗(yàn)組可以看到紅色的鈣化結(jié)節(jié)，對(duì)照組未見(jiàn)明顯的鈣化結(jié)節(jié)。說(shuō)明 hUSCs 具有成骨分化能力。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2729043