【摘要】：目的： 多種口腔黏膜病的發(fā)病與細胞凋亡密切相關；近來研究發(fā)現角質細胞生長因子(Keratinocyte growth factor receptor, KGF)不僅能特異性的促上皮細胞增殖和分化,還抑制上皮細胞的凋亡。在課題組前期對KGF的研究發(fā)現在口腔扁平苔蘚中KGF、KGFR及KGF mRNA的表達均較正常黏膜低,而KGF蛋白及KGFmRNA在口腔白斑中表達較正常黏膜高,推測KGF與口腔黏膜上皮細胞的增殖和凋亡有密切的聯系。 本實驗通過觀察不同濃度KGF對體外培養(yǎng)的口腔黏膜上皮細胞形態(tài)學影響,采用流式細胞儀技術檢測上皮細胞凋亡率的改變,并應用熒光實時定量技術檢測KGF對上皮細胞凋亡及增殖相關基因表達的影響,探討KGF對口腔黏膜上皮細胞增殖及凋亡的作用,為進一步探討研究KGF在口腔黏膜病發(fā)生發(fā)展中的作用提供依據,為口腔黏膜病的臨床治療提供一定的理論基礎。 方法： 1.體外培養(yǎng)人口腔黏膜上皮細胞,取5-10代培養(yǎng)至70～80%融合時分別加入含不同濃度KGF (0ng/ml,5ng/ml,25ng/ml,50ng/ml)的D-KFSM,將其分為對照組(KGF0ng/ml)和實驗組(KGF5ng/ml,25ng/ml,50ng/ml),共四組,培養(yǎng)12h、24h、48h后觀察人口腔黏膜上皮細胞形態(tài)的改變； 2.培養(yǎng)48h后流式細胞儀檢測各組上皮細胞的凋亡率； 3.分別培養(yǎng)12h、24h、48h后用熒光實時定量檢測各組細胞內凋亡相關基因Bcl-2、Bax mRNA的表達； 4.分別培養(yǎng)12h、24h、48h后用熒光實時定量檢測各組細胞內增殖相關基因PCNA mRNA的表達： 5.應用統(tǒng)計學方法對細胞凋亡率、Bcl-2、Bax、PCNA mRNA的表達數進行分析,得出結論。 結果： 1.觀察細胞形態(tài)：相同時間段實驗組較對照組上皮細胞貼壁緊,遮光性明顯增強,培養(yǎng)48h后,實驗3組(KGF50ng/ml)較其他組細胞核仁明顯； 2.流式細胞儀檢測細胞凋亡率：不同濃度KGF培養(yǎng)48h后,隨KGF濃度增加細胞的凋亡率減低(P0.05)； 3.熒光實時定量檢測對凋亡的影響結果顯示： (1)12h時實驗1、2組較對照組上皮細胞內Bcl-2mRNA表達無顯著差異,實驗3組較對照組Bcl-2mRNA表達逐漸增加,有統(tǒng)計學意義(P0.05)； (2)24h時,各實驗組較對照組Bcl-2mRNA表達均顯著增加(P0.05),但各實驗組間無統(tǒng)計學差異,(P0.05)； (3)48h時各實驗組較對照組Bcl-2mRNA表達均顯著增加且呈劑量依賴性,(P0.05)； (4)12h時,實驗1、2組較對照組Bax mRNA表達無明顯差異,(P0.05)；實驗3組較對照組Bax mRNA表達明顯降低(P0.05)；24h和48h時,實驗組較對照組Bax mRNA表達逐漸降低,(P0.05)； 4.熒光實時定量檢測對增殖的影響結果顯示：各時間段實驗組較對照組比PCNA mRNA表達均增加 (1)12h時,各實驗組間PCNA mRNA表達逐漸降低,(P0.05) (2)24h時實驗組較對照組PCNA mRNA表達增加,(P0.05),但各實驗組間無統(tǒng)計學差異,(P0.05)； (3)48h時,實驗組較對照組PCNA mRNA表達增加,且呈劑量依賴性,(P0.05)。 結論： 本研究發(fā)現外源性KGF能使體外培養(yǎng)的口腔黏膜上皮細胞凋亡率減低；外源性KGF可上調細胞凋亡相關基因Bcl-2mRNA的表達,下調Bax mRNA表達,并同時上調細胞增殖相關基因PCNA mRNA的表達,提示KGF通過調節(jié)細胞凋亡相關基因Bcl-2、Bax mRNA的表達抑制上皮細胞的凋亡,還能通過上調細胞增殖相關基因PCNA mRNA的表達促進上皮細胞的增殖,對上皮細胞有促進增殖和抑制凋亡的雙重作用；為進一步探討研究KGF在口腔黏膜病發(fā)生發(fā)展中的作用和治療提供依據。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R781.5

【參考文獻】

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本文編號：2723224