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牙釉質(zhì)仿生礦化的研究

發(fā)布時(shí)間:2020-06-19 18:56
【摘要】:目的本研究仿生釉質(zhì)礦化的過程,構(gòu)建類釉原蛋白寡肽作為仿生礦化的有機(jī)基質(zhì)模板,仿生釉原蛋白對(duì)磷灰石晶體的調(diào)控作用;合成包裹無機(jī)鈣磷離子的溫度敏感性脂質(zhì)體作為仿生礦化中供給鈣磷離子的載體,仿生成釉細(xì)胞分泌鈣磷離子;最終實(shí)現(xiàn)釉質(zhì)微結(jié)構(gòu)的再生,誘導(dǎo)脫礦釉質(zhì)的仿生礦化。 方法溫度敏感性脂質(zhì)體的合成本實(shí)驗(yàn)采用相交融合法(Interdigitati-on-fusion method IF法)分別合成包裹鈣、磷離子的溫度敏感性脂質(zhì)體。我們采用相變溫度較高的(41℃)二棕櫚酰磷脂酰膽堿(1,2-bis(palmitoyl)-sn-glycero-3-phosphor-choline DPPC)和相變溫度較低(248)的二肉豆蔻卵磷脂(1,2-bis(myristoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine DMPC)為原料,并調(diào)節(jié)兩者的質(zhì)量比為9:1,使合成的脂質(zhì)體膜在37℃左右發(fā)生相變,通透性增加,脂質(zhì)體內(nèi)包裹物釋放。并通過分別與CaCl2溶液和Na2HPO4溶液水合,成功合成包裹鈣磷離子的溫度敏感性脂質(zhì)體。 寡肽的合成我們通過參考釉原蛋白發(fā)生自組裝的結(jié)構(gòu)域((Gln-Pro-X)n)與其C-端親水帶電荷的氨基酸尾巴,設(shè)計(jì)一個(gè)序列為((Gln-Pro-Ala)4-Thr-Lys-Arg-Glu-Glu-Val-Asp)的“類釉原蛋白”寡肽。寡肽采用標(biāo)準(zhǔn)固相法合成,并經(jīng)質(zhì)譜儀、高效液相色譜儀等對(duì)其進(jìn)行鑒定。用CaCl2溶液誘導(dǎo)類釉原蛋白寡肽發(fā)生自組裝,組裝后的寡肽采用粒度儀測(cè)試其粒徑,以及SEM和TEM觀察其形態(tài)。 釉質(zhì)的仿生礦化首先將厚約1mm的牙片經(jīng)37%磷酸脫礦1min。其次按一定比例將包裹鈣磷離子的脂質(zhì)體與寡肽溶液混合(寡肽占混懸液總質(zhì)量的20%)。將脫礦后的牙片完全浸泡在混懸液中,37℃恒溫2周。并通過傅立葉變換紅外光譜(Fourier Transform Infrared Spectroscopy, FTIR)、X射線衍射(X-ray Diffraction XRD)、掃描電鏡(scanning electron microscope SEM)等對(duì)牙片表面新沉積的物質(zhì)進(jìn)行結(jié)果分析。 結(jié)果通過IF法成功合成了溫度敏感性脂質(zhì)體,其平均粒徑為161.3nm,鈣磷離子的包裹率約為60%~85%。室溫條件下脂質(zhì)體穩(wěn)定,在37℃條件下,鈣磷離子可以持續(xù)釋放。采用固相合成法合成了一種類釉原蛋白的寡肽分子。經(jīng)質(zhì)譜與高效液相色譜儀檢測(cè)其分子量為2061.26、多肽純度為99.46%。Ca2+可以誘導(dǎo)其發(fā)生自組裝,采用粒度儀測(cè)得組裝后的平均粒徑為1415nm, SEM和TEM顯示自組裝為納米球狀結(jié)構(gòu)。將上述脂質(zhì)體與寡肽溶液應(yīng)用于脫礦牙片再礦化實(shí)驗(yàn)中,SEM結(jié)果顯示對(duì)照組(只運(yùn)用脂質(zhì)體)沉積了的HA晶體較少,而且這種沉積是無序的、隨機(jī)的。而在實(shí)驗(yàn)組(寡肽與脂質(zhì)體混合組)在釉質(zhì)表面均勻沉積了很多有序排列的釉質(zhì)樣晶體結(jié)構(gòu)。FTIR及XRD光譜證實(shí)了對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組新沉積的晶體為HA。 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功合成了包裹鈣磷的溫度敏感性脂質(zhì)體,并且在生理溫度時(shí)所合成的脂質(zhì)體可以持續(xù)釋放所包裹的Ca2+及P043-,供給礦化所需的無機(jī)離子。并通過固相合成法合成了一種類釉原蛋白寡肽分子((Gln-Pro-Ala)4-Thr-Lys-Arg-Glu-Glu-Val-Asp),它能在Ca2+觸發(fā)下自組裝為納米球狀結(jié)構(gòu)。脫礦釉質(zhì)可在“包裹鈣磷離子的溫度敏感性脂質(zhì)體”與“類釉原蛋白”寡肽的共同作用下初步實(shí)現(xiàn)釉質(zhì)微結(jié)構(gòu)的再生
【學(xué)位授予單位】:安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類號(hào)】:R783

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本文編號(hào):2721208

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