發(fā)布時(shí)間：2020-06-18 23:49

【摘要】：背景與目的:牙周炎是口腔中以菌斑生物膜為始動(dòng)因素的慢性感染性炎癥疾病,會(huì)造成牙周軟硬組織的破壞。因此,恢復(fù)或部分恢復(fù)牙周軟硬組織是牙周組織工程的重要目標(biāo)。被多數(shù)學(xué)者公認(rèn),牙周膜干細(xì)胞在牙周組織工程中扮演著重要的角色,但是其增殖和分化能力又會(huì)受到諸多牙周微環(huán)境的影響,諸如許多炎性因子,其中腫瘤壞死因子αα(TNF-c4)是牙周炎發(fā)病機(jī)制中的主要調(diào)節(jié)因子,會(huì)對(duì)干細(xì)胞的成骨分化產(chǎn)生負(fù)性作用。因此獲取一種特殊的生物活性因子,它既能促進(jìn)干細(xì)胞的成骨分化,同時(shí)又可以拮抗炎癥反應(yīng),促進(jìn)牙周組織的再生和修復(fù)是牙周再生領(lǐng)域重要的目標(biāo)。顆粒蛋白前體(PGRN)已被證實(shí)在抗炎和促進(jìn)骨形成中發(fā)揮重要作用,但PGRN對(duì)炎性牙周骨缺損的影響尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)探索PGRN是否可以促進(jìn)炎性環(huán)境下的牙周骨再生,為炎性環(huán)境下的牙周組織再生提供新的治療思路。材料與方法:(1)構(gòu)建大鼠牙周炎模型:將54只Wistar雄鼠隨機(jī)分成兩組:牙周炎組和健康組。術(shù)者對(duì)牙周炎組大鼠左下頜第一磨牙頸部行正畸結(jié)扎,同時(shí)搭配高糖飲食;健康組大鼠不做任何處理、正常飲食。兩周后行放射學(xué)(Micro-CT)掃描和組織病理學(xué)(HE)觀察。(2)構(gòu)建牙周炎骨缺損模型:將牙周炎大鼠隨機(jī)分為三組,分別為:負(fù)載磷酸鹽緩沖液(PBS)的膜材料組,負(fù)載重組人顆粒蛋白前體(rhPGRN)的膜材料組,負(fù)載抗腫瘤壞死因子α(anti-TNF-α)的膜材料組。在已形成牙周炎的大鼠左側(cè)第一和第二磨牙的頰側(cè)制備3x2xl mm的牙周骨缺損區(qū)域,分別將膜材料放置在骨缺損區(qū)域。術(shù)后1,4,6周處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物并取材。(3)采用放射學(xué)(Micro-CT)掃描和組織形態(tài)學(xué)(H.E.和Masson)染色評(píng)估PGRN對(duì)新生骨的作用。(4)通過免疫組化檢測(cè)ALP,Runx2的表達(dá)以及TRAP染色檢測(cè)破骨細(xì)胞的表達(dá)來分析PGRN的成骨破骨活性的能力。(5)通過免疫組化檢測(cè)TNF-α的表達(dá)來評(píng)價(jià)PGRN的抗炎能力。(6)運(yùn)用免疫熒光染色來檢測(cè)PGRN與TNFRs的相互作用關(guān)系。結(jié)果:(1)放射學(xué)和組織形態(tài)學(xué)染色結(jié)果顯示牙周炎組大鼠的牙槽骨吸收明顯,同時(shí)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯;健康組無明顯的骨吸收(p0.05)。(2)組織學(xué)染色和放射學(xué)掃描結(jié)果發(fā)現(xiàn)rhPGRN組新生骨的體積、質(zhì)量明顯高于PBS組和anti-TNF-α 組(p0.05)。(3)ALP,Runx2免疫組化染色結(jié)果顯示rhPGRN組的蛋白表達(dá)明顯高于PBS組和anti-TNF-α 組(p0.05)。(4)TNF-α免疫組化染色結(jié)果顯示rhPGRN組和anti-TNF-α組的TNF-α 陽性細(xì)胞表達(dá)顯著低于PBS組(p0.05)。(5)TRAP染色結(jié)果顯示rhPGRN組和anti-TNF-α組的陽性破骨細(xì)胞表達(dá)明顯低于PBS組(p0.05)。(6)免疫熒光染色結(jié)果顯示rhPGRN組的TNFR2的表達(dá)明顯高于其余兩組(p0.05),但TNFR1的表達(dá)在三組間無明顯差異。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)表明PGRN通過抗炎、抑制破骨細(xì)胞生成和促進(jìn)成骨來促進(jìn)大鼠牙周炎性骨缺損的再生。PGRN在促進(jìn)成骨細(xì)胞分化及牙周骨再生方面的能力明顯優(yōu)于anti-TNF-α,并且PGRN主要是通過與TNFR2結(jié)合來發(fā)揮作用的。局部應(yīng)用PGRN可在炎性環(huán)境下對(duì)牙周骨再生起促進(jìn)作用,為炎性環(huán)境下牙周再生治療提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R781.4
【圖文】：

圖１大鼠實(shí)驗(yàn)性牙周炎模型的組織學(xué)和放射學(xué)分析結(jié)果。逡逑（ａ）邐Ｍｉｃｒｏ－ＣＴ顯示健康組牙槽骨水平。大鼠左側(cè)下頜第一磨牙與第二磨牙牙槽逡逑間隔骨水平基本位于ＣＥＪ水平。逡逑（ｂ）邐Ｍｉｃｒｏ－ＣＴ顯示牙周炎組牙槽骨吸收情況。第一第二磨牙牙槽間隔可見明顯逡逑骨吸收。逡逑（Ｃ）ＨＥ染色可見牙周炎組第一磨牙與第二磨牙牙槽間隔有明的顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)逡逑和骨吸收。逡逑（ｄ）邐ＨＥ染色為健康組。未見明顯的骨吸收和炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。逡逑（ｅ）第一磨牙遠(yuǎn)端根ＣＥＪ到ＡＢＣ距離的統(tǒng)計(jì)分析（ｍｍ）。＊；７＜０．０５，與健康組逡逑相比較；Ｍｌ：第一下頜磨牙；Ｍ２：第二下頜磨牙；Ｍ３：第三下頌?zāi)パ馈ｅ义希玻卞义?

圖２構(gòu)建大鼠牙周炎骨缺損模型。在大鼠左側(cè)下頜第一磨頰側(cè)牙槽骨制備出長(zhǎng)逡逑３ｍｍ，寬２ｍｍ，深１ｍｍ的長(zhǎng)方形骨缺損，去除牙槽嵴頂，暴露牙根表面。將載逡逑藥膠原膜植入骨缺損。逡逑（ａ）制備的骨缺損區(qū)。逡逑（ｂ）移植富含不同生長(zhǎng)因子的膠原膜置于骨缺損區(qū)。逡逑

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1 金黎明;劉萬順;韓寶芹;田文杰;趙小菁;范圣第;;骨缺損的治療研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2006年12期

2 李佰;同種異體脫鈣骨移植修復(fù)骨缺損[J];修復(fù)重建外科雜志;1988年02期

3 王昆潤(rùn);;骨缺損處植入胎盤刺激頜骨再生[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè);1988年04期

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本文編號(hào)：2720001