【摘要】： 變形鏈球菌(Mutans streptococci,簡稱變鏈菌或MS)所產(chǎn)生的具有抗菌作用的蛋白成分叫變鏈素(mutacin)。隨著耐藥菌株的不斷出現(xiàn),迫使人們不斷地尋找新的抗生素。變鏈素具有廣譜抑菌,低作用濃度(MIC)和對青霉素等耐藥菌株有效的特點(diǎn),有可能成為新抗生素的來源,因此變鏈素具有很大的潛在應(yīng)用前景,對它的進(jìn)一步研究很有應(yīng)用意義。近年來對變鏈素的研究和開發(fā)逐漸成為口腔微生物學(xué)領(lǐng)域的一個(gè)前沿課題,不斷有新的變鏈素被發(fā)現(xiàn)。本研究從MS臨床分離株中篩選出變鏈素活性最強(qiáng)的菌株入手,粗提并分離純化其所產(chǎn)生的變鏈素,為進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)和研究新變鏈素,進(jìn)行氨基酸測序,基因克隆等相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。 方法從3～5歲的兒童中隨機(jī)選取10例高齲兒童(dmft≥8)和10例無齲兒童(dmft=0),采集其口腔中的牙菌斑,經(jīng)分離、鑒定得到80株變形鏈球菌臨床分離株,分為高齲組和無齲組(各40株)。用平板法檢測兩組菌株所產(chǎn)生的變鏈素對口腔鏈球菌(Streptococcus oralis)標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC 10557的抑制情況,觀察兩組菌株產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小,測量并記錄數(shù)據(jù)。從中選取變鏈素活性最強(qiáng)的一株變形鏈球菌臨床株,采用氯仿抽提法粗提其所產(chǎn)生的變鏈素,再將粗提物經(jīng)固相萃取柱洗脫,收集洗脫液并凍干,將檢測有活性的物質(zhì)重溶于0.1%TFA后經(jīng)反相高效液相色譜(RP-HPLC)兩次分離純化。粗提物經(jīng)第一次RP-HPLC純化后,將收集的洗脫液凍干經(jīng)活性檢測后,合并有活性的物質(zhì)再以相同的洗脫條件進(jìn)行第二次RP-HPLC純化,再將洗脫液收集凍干并進(jìn)行活性檢測,檢測出的有活性的物質(zhì)即為純化的變鏈素。 結(jié)果1.高齲組共40株菌株對ATCC 10557產(chǎn)生的最大抑菌環(huán)直徑為21mm,最小為6mm,平均值為10.4mm。無齲組共40株菌株對指示株ATCC 10557產(chǎn)生的最大抑菌環(huán)直徑為28mm,最小為0mm,平均值為6.9mm,T檢驗(yàn)顯示兩組差異具有顯著性(t值為3.098,P0.05)。 2.從上述菌株中選取的產(chǎn)生變鏈素活性最強(qiáng)的菌株“1G”(產(chǎn)生的抑菌環(huán)平均直徑為20mm)。從該菌株的200ml液體培養(yǎng)基粗提出變鏈素約15ug,經(jīng)固相萃取柱洗脫,RP-HPLC兩次分離純化,得到純化的變鏈素。 結(jié)論變鏈素的產(chǎn)生在變鏈菌臨床分離株中具有廣泛性(88%MS臨床株對指示株都產(chǎn)生抑菌環(huán)),且變鏈素的產(chǎn)生在菌株和個(gè)體之間是具有差異性的;變鏈素分子量小,分離提純步驟較復(fù)雜,本實(shí)驗(yàn)組通過氯仿抽提法,固相萃取技術(shù)和RP-HPLC純化技術(shù)將變鏈素粗提并分離純化,為變鏈素的氨基酸測序和基因克隆等相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R78
【圖文】：

鏈素活性檢測 實(shí)驗(yàn)菌株口腔鏈球菌選取國際標(biāo)準(zhǔn)菌株 Streptococcus oralis ATCC 10557。 變鏈素活性檢測deferred antagonism 方法引自參考文獻(xiàn)[10]。具體操作步驟如下：將上述鏈菌分離菌株復(fù)蘇，接種于TPY平板上（含2%瓊脂），厭氧箱中37℃孵育Y（含0.75%瓊脂）平板上打小孔若干（孔徑為3mm），每個(gè)MS菌株挑菌落在每個(gè)小孔上接種，48h后在小孔的壁上長滿一層厚厚的菌落，此0.8%瓊脂的TPY加熱溶化，待冷卻到50～60℃時(shí)，向其注入0.5ml濃度為圖 1 變形鏈球菌臨床株在 MSB 培養(yǎng)基上的典型形態(tài)Fig 1 Distinctive colony morphology of mutans streptococci on MS medium

11圖 2 高齲組變鏈菌臨床分離株產(chǎn)生的抑菌環(huán)7G1：直徑為 8mm； 7G2：直徑為 7mm；9G1：直徑為 9mm； 9G4：直徑為 7mm。nhibition zones of MS isolates from caries-acthibition zone is 8mm; 7G2:Diameter of inhinhibition zone is 10mm; 9G4:Diameter of inhi

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 陸成華;變形鏈球菌對種植體周圍炎可疑致病菌抑制實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2713885