【摘要】： 吸煙損傷牙周組織,是慢性牙周炎的主要危險(xiǎn)因素。吸煙人群牙周炎的發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于非吸煙人群,并且在牙周炎患者中,吸煙人群的牙周組織破壞更加明顯。尼古丁作為煙草中的主要生物堿,除可直接損傷牙周組織,還可通過妨礙牙周組織免疫系統(tǒng)正常功能加速其損壞,但確切作用機(jī)制尚未明了。 研究發(fā)現(xiàn),膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(choline acetyltransferase,ChAT)在尼古丁對(duì)機(jī)體組織損傷過程中發(fā)揮重要作用。為觀察膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(choline acetyltransferase , ChAT)在人牙周膜成纖維細(xì)胞(Periodontal ligament fibroblast,PDLF)中的表達(dá),并探討ChAT調(diào)節(jié)在參與尼古丁對(duì)PDLF損傷過程中的作用,本研究通過建立尼古丁作用下PDLF體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?采用RT-PCR,DNA測(cè)序和免疫組化等方法,觀察PDLF中是否存在ChAT及在尼古丁作用下其表達(dá)的改變。旨在探討ChAT在尼古丁與吸煙相關(guān)性牙周炎發(fā)生發(fā)展中的作用,為尋找新的牙周炎防治途徑提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 1人牙周膜成纖維細(xì)胞中ChAT的表達(dá) 取12-18歲志愿者正畸減數(shù)拔除的健康第一前磨牙,刮取根中1/3處牙周膜組織,改良組織塊法原代培養(yǎng)PDLF,鑒定,傳代,4-6代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。采用免疫熒光及RT-PCR方法檢測(cè)PDLF中ChAT的表達(dá)。免疫熒光結(jié)果顯示,PDLF胞漿中存在ChAT的陽性表達(dá);RT-PCR結(jié)果顯示在與陽性對(duì)照組相同位置299 bp處可見陽性條帶,且經(jīng)克隆測(cè)序證實(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物為ChAT。初步證實(shí),在PDLF中存在ChAT蛋白及mRNA表達(dá)。 2尼古丁對(duì)ChAT在人牙周膜成纖維細(xì)胞中表達(dá)的影響 第4代PDLF隨機(jī)分為兩組,對(duì)照組:5%新生牛血清DMEM培養(yǎng)液;實(shí)驗(yàn)組:尼古丁硫酸鹽(10-12mol/L)溶于含5%新生牛血清DMEM培養(yǎng)液。37℃、5% CO2孵箱中孵育24h。RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR及免疫熒光方法檢測(cè)尼古丁對(duì)ChAT在PDLF表達(dá)的影響。 免疫熒光結(jié)果顯示,正常及尼古丁作用下PDLF存在ChAT陽性表達(dá),表達(dá)主要位于胞漿。與對(duì)照組相比,尼古丁作用24h后,實(shí)驗(yàn)組PDLF ChAT陽性信號(hào)增強(qiáng)。RT-PCR結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,尼古丁作用24h后PDLF PCR擴(kuò)增產(chǎn)物ChAT mRNA陽性表達(dá)增強(qiáng);經(jīng)quantity one分析,表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P㩳0.05),實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)一步證實(shí)該結(jié)果。 以上結(jié)果證實(shí),PDLF中存在ChAT蛋白、mRNA表達(dá);尼古丁可明顯上調(diào)其表達(dá)。由此推測(cè)ChAT可能為尼古丁在牙周組織的作用靶點(diǎn),在吸煙相關(guān)性牙周炎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R781.4
【圖文】：

圖1 PDLF 原代及第4代細(xì)胞培養(yǎng)P0：PDLF 原代培養(yǎng) P4：PDLF 第4代培養(yǎng)1.4.2 細(xì)胞鑒定第4代培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)免疫組化染色鑒定，波形絲蛋白陽性，角蛋白陰性，證明所培養(yǎng)細(xì)胞為來自中胚層（圖2）。IHCIHCV 10× C10×

1.4.2 細(xì)胞鑒定第4代培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)免疫組化染色鑒定，波形絲蛋白陽性，角蛋白陰性，證明所培養(yǎng)細(xì)胞為來自中胚層（圖2）。圖2 波形絲蛋白及角蛋白免疫組化染色V：波形絲蛋白 C：角蛋白IHCIHCV 10× C10×

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;腳趾甲中尼古丁含量預(yù)測(cè)肺癌風(fēng)險(xiǎn)[J];中學(xué)生物教學(xué);2011年05期

2 郭麗麗;吳志浩;周清華;;尼古丁及尼古丁乙酰膽堿受體在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用[J];中國(guó)肺癌雜志;2011年09期

3 王琦;;近年來煙草公司提高煙中尼古丁含量[J];心血管病防治知識(shí);2007年04期

4 湯泰秦;;戒煙是預(yù)防心腦血管病的重要措施之一——吸煙有害生命戒煙有益健康[J];心血管病防治知識(shí);2008年03期

5 唐維薇;;趾甲上的尼古丁預(yù)測(cè)心臟問題[J];心血管病防治知識(shí);2008年08期

6 傅楚芬;;戒煙者才是勝利者[J];心血管病防治知識(shí);2008年10期

7 胡大一;;吸煙實(shí)際上是一種慢性成癮性疾病[J];糖尿病新世界;2011年07期

8 ;研究稱孕婦使用戒煙片影響胎兒健康[J];中國(guó)社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè));2011年24期

9 卜欠欠;曾慧蘭;;尼古丁對(duì)成體干細(xì)胞凋亡及增殖的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年15期

10 ;美研究發(fā)現(xiàn)煙民戒煙后發(fā)胖原因:尼古丁控制食欲[J];科技傳播;2011年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 楊玉萍;郭靜;韓生成;;煙草尼古丁合成的分子調(diào)控[A];中國(guó)植物學(xué)會(huì)植物細(xì)胞生物學(xué)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

2 萬虎;高娃;陳沖;宋紀(jì)真;趙海剛;陳炳來;李建洪;;尼古丁降解菌的分離、鑒定及其降解特性研究[A];中國(guó)微生物學(xué)會(huì)《第二屆全國(guó)農(nóng)業(yè)微生物研究及產(chǎn)業(yè)化研討會(huì)》和《第十一屆全國(guó)殺蟲微生物學(xué)術(shù)研討會(huì)》暨《湖北省暨武漢市微生物學(xué)會(huì)和內(nèi)蒙古微生物學(xué)會(huì)2008年會(huì)》論文摘要[C];2008年

3 薛光杰;薛夙君;周明岳;杜明勛;;多層面之戒菸治療介入[A];第15屆全國(guó)控制吸煙學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2011年

4 單宏麗;呂延杰;張勇;潘振偉;李雪連;楊寶峰;;microRNAs在尼古丁誘導(dǎo)犬心房重構(gòu)中的作用研究[A];第七屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2009年

5 馮宇;;尼古丁替代法簡(jiǎn)介[A];第12屆全國(guó)吸煙與健康學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第二屆煙草控制框架公約論壇論文集[C];2005年

6 王蓮蕓;周穎;王亞靜;喬中東;;尼古丁對(duì)細(xì)胞因子和粘附分子表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第二次全國(guó)變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

7 路承彪;;尼古丁膽堿能受體激活對(duì)內(nèi)側(cè)縱膈-海馬系統(tǒng)網(wǎng)絡(luò)振蕩的影響[A];中南地區(qū)第八屆生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要匯編[C];2012年

8 侯冬巖;回瑞華;叢秀枝;李學(xué)成;劉曉媛;;煙草中尼古丁的HPLC法分析[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十三屆有機(jī)分析與生物分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

9 藍(lán)曉紅;繆朝玉;;尼古丁治療和撤藥引起的脂肪和血管改變[A];第九屆全國(guó)心血管藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

10 藍(lán)曉紅;周永剛;繆朝玉;;尼古丁及其撤藥引起的脂肪和血管功能的改善[A];臨床安全合理用藥的現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)理念——中國(guó)藥理學(xué)會(huì)藥學(xué)監(jiān)護(hù)專業(yè)委員會(huì)第一屆第三次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 姚一飛;將尼古丁快感擋在大腦外[N];北京科技報(bào);2001年

2 李曉康;蔬菜也含尼古丁[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2000年

3 吳志　羅金財(cái) 胡軍;尼古丁 毒藥能否變良藥[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

4 陳佳利;為尼古丁平反證據(jù)不足[N];南方日?qǐng)?bào);2006年

5 記者 白京麗;拮抗尼古丁更有助于戒煙[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

6 沈永昌;“尼古丁饑餓癥”警示世人[N];大眾科技報(bào);2002年

7 陽毅;酒精可強(qiáng)化尼古丁作用[N];中國(guó)石油報(bào);2004年

8 董歡霽;尼古�。悍伟┗熕幬锏摹捌茐耐酢保縖N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

9 周麗;“尼古丁迷霧”困擾消費(fèi)者 “如煙”省會(huì)銷量下跌[N];河北日?qǐng)?bào);2006年

10 單姍;新疫苗能對(duì)尼古丁產(chǎn)生抗體[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李琪;尼古丁在吸煙導(dǎo)致氣道慢性炎癥中的獨(dú)特效應(yīng)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

2 徐添穎;尼古丁對(duì)血管功能和胰島素敏感性的影響及機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

3 安佰義;煙草尼古丁去甲基化酶的結(jié)構(gòu)和功能研究[D];吉林大學(xué);2011年

4 周穎;α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞損傷與保護(hù)的影響[D];上海交通大學(xué);2010年

5 高豐光;尼古丁刺激DCs抗腫瘤機(jī)制及腫瘤微環(huán)境DCs失能研究[D];上海交通大學(xué);2008年

6 金宇;尼古丁介導(dǎo)的VTA DA神經(jīng)元谷氨酸能突觸可塑性的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

7 成曉龍;1、尼古丁對(duì)內(nèi)皮損傷的影響及其作用機(jī)制的探討2、胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞的初步研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2004年

8 王小競(jìng);尼古丁對(duì)鼠牙胚發(fā)育影響的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

9 程斌;NakadomarinA、Subincanadine C以及含氟尼古丁類似物的合成研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2009年

10 周衛(wèi)輝;尼古丁對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞間粘附分子-1及其基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 葛鑫;膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶在人牙周膜細(xì)胞中的表達(dá)及尼古丁對(duì)其表達(dá)的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

2 杜艷;尼古丁對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞纖溶平衡的影響及其作用機(jī)制[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

3 尹彪;尼古丁降解菌的分離、鑒定及其應(yīng)用研究[D];湖南科技大學(xué);2010年

4 王勇;乙酰膽堿酯酶在人牙周膜細(xì)胞中的表達(dá)和尼古丁與-銀環(huán)蛇毒素對(duì)其表達(dá)的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 袁乾家;尼古丁類似物的設(shè)計(jì)合成[D];華東理工大學(xué);2011年

6 俞峰;妊娠期尼古丁對(duì)胎兒和子代心律失常的影響[D];蘇州大學(xué);2010年

7 扈麗娟;尼古丁對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞纖溶損害的機(jī)制及辛伐他汀的干預(yù)作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

8 薄美玉;尼古丁對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞纖溶功能的影響及其與內(nèi)皮素-I和白介素-6的關(guān)系[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

9 陳亮;尼古丁藥動(dòng)學(xué)中的微透析與穩(wěn)定同位素標(biāo)記聯(lián)用技術(shù)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2010年

10 李斌龍;大蒜素對(duì)尼古丁致牙周膜成纖維細(xì)胞氧化毒性的保護(hù)作用[D];中南大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2713360