發(fā)布時(shí)間：2020-06-14 05:15

【摘要】：目的1.牽張成骨(distraction osteogenesis, DO)也稱(chēng)作牽引成骨,是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)頗有價(jià)值的臨床技術(shù),有著較大的臨床應(yīng)用的潛力,同時(shí)為我們研究骨組織再生的基本機(jī)理開(kāi)辟了新的途徑�；A(chǔ)理論研究離不開(kāi)良好的動(dòng)物模型的建立,本實(shí)驗(yàn)將用兔建立下頜牽張成骨實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,探討建立一種可行性及可重復(fù)性強(qiáng)的下頜牽張成骨動(dòng)物模型的方法。 2.肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)又稱(chēng)為擴(kuò)散因子,最早是從血漿及血小板中純化獲得,它被認(rèn)為是一種能刺激肝細(xì)胞生長(zhǎng)增生的有絲分裂原,對(duì)肝切除和化學(xué)損傷后肝的再生起重要作用。HGF同時(shí)又是一種具有比較強(qiáng)的誘導(dǎo)血管生成作用的細(xì)胞因子,和其他促血管生成因子如VEGF,bFGF等類(lèi)似,可以加強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞在模擬血管生成的微環(huán)境內(nèi)形成管狀結(jié)構(gòu)的能力。本實(shí)驗(yàn)將在已建立的兔下頜牽張成骨動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,研究HGF在下頜DO過(guò)程中的表達(dá)及分布規(guī)律,探討其在下頜DO過(guò)程中的作用和機(jī)理,以求尋找一種縮短DO療程的新途徑。 方法 一：選用16只成年新西蘭大白兔,體重分布在3.3～3.5kg。全麻條件下,沿下頜骨下緣將皮膚切開(kāi),分離軟組織及骨膜,暴露出骨面。在生理鹽水沖洗降溫的條件下,用金剛砂片于下頜第一前磨牙前約1 mm處無(wú)牙區(qū)行皮質(zhì)骨切開(kāi)術(shù),切開(kāi)頰側(cè)及下頜下緣皮質(zhì)骨,以薄骨鑿插入裂隙將下頜體折斷,造成人為骨折。操作時(shí)注意保護(hù)好骨膜、骨髓及下牙槽血管。充分止血后,將骨段以自制骨支持式口外下頜雙側(cè)牽張器固定,分層縫合,嚴(yán)密關(guān)閉創(chuàng)口。術(shù)后骨段原位固定7d(間歇期),從第8d開(kāi)始以0.25mm/6h的速度進(jìn)行牽張,連續(xù)7d(牽張期),然后固定(固定期)。分別在間歇期末、牽張結(jié)束、固定期第14d、28d,隨機(jī)處死4只動(dòng)物。取大體標(biāo)本進(jìn)行觀察,并通過(guò)X線(xiàn)和組織學(xué)方法檢查牽張區(qū)新骨形成的情況,探討模型建立的方法。 二：選用成年新西蘭大白兔44只,隨機(jī)分為三組。分別為牽張組、骨折對(duì)照組和正常對(duì)照組,各20、20、4只動(dòng)物。牽張組按前述方法建立下頜牽張成骨動(dòng)物模型并進(jìn)行牽張；骨折對(duì)照組用相同方法造成下頜骨骨折并用牽張器固定,但是不進(jìn)行牽張；正常對(duì)照組取正常下頜骨組織作為對(duì)照。于不同時(shí)期處死動(dòng)物,標(biāo)本行免疫組織化學(xué)(immunohistochemical, IHC)染色,觀察HGF的表達(dá)及分布情況。采用半定量法對(duì)組織切片著色強(qiáng)度分級(jí)評(píng)分,結(jié)果采用SPSS10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。 結(jié)果 一：全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的下頜骨被成功延長(zhǎng),X線(xiàn)檢查見(jiàn)牽張間隙逐漸由新生骨組織充填。組織學(xué)切片觀察：間歇期末,裂隙近遠(yuǎn)中骨皮質(zhì)為骨痂覆蓋,可見(jiàn)擴(kuò)張的新生毛細(xì)血管及軟骨樣組織形成；牽張結(jié)束,間隙內(nèi)充滿(mǎn)沿牽張方向排列的大量新生毛細(xì)血管及成纖維細(xì)胞,膠原纖維周?chē)�、皮質(zhì)骨斷端和骨髓腔附近有新骨形成,新生骨小梁表面有肥大的成骨細(xì)胞；固定期第14d,牽張區(qū)骨小梁數(shù)量增多,纖維成分減少,骨小梁多數(shù)沿牽張方向平行排列,部分交織成網(wǎng)并出現(xiàn)鈣化,其間有大量新生血管,成骨細(xì)胞在新生骨小梁表面排成一層,成骨活躍；固定第28d,裂隙中央出現(xiàn)鈣化的骨小梁,周?chē)律切×捍执?連接成片,原骨斷端附近,不成熟的骨小梁消失,新生骨在結(jié)構(gòu)上已近似于原先成熟的骨質(zhì)。牽張過(guò)程中間隙內(nèi)新骨形成方式以膜內(nèi)成骨為主,動(dòng)物模型在組織學(xué)上與相關(guān)報(bào)道吻合。 二：牽張及骨折組HGF表達(dá)增加,陽(yáng)性著色主要定位于內(nèi)皮細(xì)胞胞膜和胞漿；破骨細(xì)胞表達(dá)HGF僅出現(xiàn)于術(shù)后1w左右；正常對(duì)照組骨組織無(wú)陽(yáng)性著色。牽張及骨折組HGF表達(dá)在術(shù)后1w開(kāi)始增加,術(shù)后2～3w時(shí)達(dá)到最強(qiáng),隨后表達(dá)強(qiáng)度下降,至術(shù)后7w時(shí),兩組IHC染色為陰性。牽張組較骨折組HGF的表達(dá)強(qiáng)度大,持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。 結(jié)論1.本實(shí)驗(yàn)成功建立了兔下頜牽張成骨動(dòng)物模型,它能夠較好的反映下頜牽張成骨過(guò)程中在不同時(shí)期牽張間隙內(nèi)新生組織的生理及病理學(xué)變化,可重復(fù)性較強(qiáng)。該模型可在動(dòng)物下頜骨兩側(cè)施以不同干預(yù)方式,即能夠利用同一動(dòng)物研究?jī)煞N不同基因或生物活性物質(zhì)對(duì)牽張成骨的影響,進(jìn)行對(duì)照,可更好的滿(mǎn)足當(dāng)前研究的需要,增加了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,這對(duì)于進(jìn)一步深入研究牽張成骨的生物學(xué)機(jī)制,提高實(shí)驗(yàn)研究效率具有重要的實(shí)用價(jià)值。 2.DO和骨折過(guò)程中間充質(zhì)細(xì)胞和血管壁細(xì)胞細(xì)胞均表達(dá)HGF,而DO過(guò)程中HGF表達(dá)較強(qiáng)。HGF通過(guò)促進(jìn)血管形成,在保證局部供養(yǎng)、促進(jìn)骨再生方面具有重要作用。牽張成骨過(guò)程中,間隙內(nèi)張力的存在可能對(duì)HGF的表達(dá)具有增強(qiáng)作用。 【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R782

【圖文】：

1.2.3建立牽引成骨動(dòng)物模型①麻醉后將動(dòng)物雙側(cè)的頰部、頗下區(qū)、頸部進(jìn)行備皮，消毒以后鋪洞巾;②沿著下領(lǐng)角的前切跡，以此作為后界，自一側(cè)頰下沿著下領(lǐng)下緣，切開(kāi)皮膚scm。切開(kāi)皮下及頸闊肌，在下領(lǐng)骨下緣略偏頰側(cè)，可見(jiàn)一條“白線(xiàn)”(圖l一2);③此為下領(lǐng)舌骨肌在下領(lǐng)體的附著處，沿“白線(xiàn)”切開(kāi)到骨膜，用精細(xì)剝離子仔細(xì)將頰側(cè)骨膜掀起。④預(yù)先用裂鉆在下領(lǐng)下緣處打孔，準(zhǔn)備截骨后固定牽引器所用，裂鉆的轉(zhuǎn)速控制在2000轉(zhuǎn)/min以下，用生理鹽水沖洗降溫。⑤保護(hù)好動(dòng)物頰側(cè)的骨膜和軟組織，用金剛砂片將截骨處頰側(cè)和下領(lǐng)下緣的骨皮質(zhì)進(jìn)行切開(kāi)，用薄骨鑿插入裂隙，輕輕旋轉(zhuǎn)到下領(lǐng)體折斷，造成人工骨折，操作中盡量不要損傷下牙槽血管和舌側(cè)骨膜，依同法完成對(duì)側(cè)的手術(shù);

⑥將離斷的下領(lǐng)骨用牽引器進(jìn)行復(fù)位固定。⑦妥善的止血后，嚴(yán)密縫合骨膜，并分層縫合肌肉和皮膚，牽引器的固定腳由皮膚創(chuàng)口處穿出(圖1一3)。⑧牽引裝置穿出皮膚的創(chuàng)口處采用荷包縫合后，覆蓋碘仿紗條防止感染。飯側(cè)期圖1一3牽張手術(shù)結(jié)束后，縫合完成1.2.4動(dòng)物術(shù)后的護(hù)理術(shù)后吧動(dòng)物送回籠中，，側(cè)臥位以保證呼吸道通暢，并注意保溫。動(dòng)物完全清醒以后給予切碎青飼料喂養(yǎng)2周，然后以成品復(fù)合飼料進(jìn)行喂養(yǎng)。手術(shù)當(dāng)天開(kāi)始肌注慶大霉素2萬(wàn)U和青霉素40萬(wàn)U，連續(xù)5天，每天兩次。術(shù)后的第7天拆掉皮膚縫線(xiàn)和碘仿紗條。1.2.5牽引延長(zhǎng)下領(lǐng)骨術(shù)后動(dòng)物下領(lǐng)骨于原位固定7天，自第8天開(kāi)始

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 鄭曉輝,田衛(wèi)東,龍潔,李聲偉;山羊下頜骨頦孔區(qū)成骨細(xì)胞增殖節(jié)律的實(shí)驗(yàn)研究[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2003年01期

2 龍潔,田衛(wèi)東,鄭曉輝,李聲偉;牽張成骨對(duì)山羊下頜骨成骨細(xì)胞增殖節(jié)律的影響[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2003年02期

3 胡靜,李繼華,王大章,廖運(yùn)茂;用山羊建立下頜牽張成骨實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2000年01期

4 黃韻,哈小琴,吳祖澤;肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)主要器官/組織損傷的修復(fù)作用[J];生物技術(shù)通訊;2003年03期

5 李繼華,王大章,胡靜,廖運(yùn)茂,王虎;牽張成骨術(shù)在延長(zhǎng)下頜骨中新骨生成方式的研究[J];中國(guó)修復(fù)重建外科雜志;2002年02期

本文編號(hào)：2712337