【摘要】：目的1.牽張成骨(distraction osteogenesis, DO)也稱作牽引成骨,是近年來發(fā)展起來的一項頗有價值的臨床技術,有著較大的臨床應用的潛力,同時為我們研究骨組織再生的基本機理開辟了新的途徑。基礎理論研究離不開良好的動物模型的建立,本實驗將用兔建立下頜牽張成骨實驗動物模型,探討建立一種可行性及可重復性強的下頜牽張成骨動物模型的方法。 2.肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)又稱為擴散因子,最早是從血漿及血小板中純化獲得,它被認為是一種能刺激肝細胞生長增生的有絲分裂原,對肝切除和化學損傷后肝的再生起重要作用。HGF同時又是一種具有比較強的誘導血管生成作用的細胞因子,和其他促血管生成因子如VEGF,bFGF等類似,可以加強內(nèi)皮細胞在模擬血管生成的微環(huán)境內(nèi)形成管狀結(jié)構的能力。本實驗將在已建立的兔下頜牽張成骨動物模型的基礎上,研究HGF在下頜DO過程中的表達及分布規(guī)律,探討其在下頜DO過程中的作用和機理,以求尋找一種縮短DO療程的新途徑。 方法 一：選用16只成年新西蘭大白兔,體重分布在3.3～3.5kg。全麻條件下,沿下頜骨下緣將皮膚切開,分離軟組織及骨膜,暴露出骨面。在生理鹽水沖洗降溫的條件下,用金剛砂片于下頜第一前磨牙前約1 mm處無牙區(qū)行皮質(zhì)骨切開術,切開頰側(cè)及下頜下緣皮質(zhì)骨,以薄骨鑿插入裂隙將下頜體折斷,造成人為骨折。操作時注意保護好骨膜、骨髓及下牙槽血管。充分止血后,將骨段以自制骨支持式口外下頜雙側(cè)牽張器固定,分層縫合,嚴密關閉創(chuàng)口。術后骨段原位固定7d(間歇期),從第8d開始以0.25mm/6h的速度進行牽張,連續(xù)7d(牽張期),然后固定(固定期)。分別在間歇期末、牽張結(jié)束、固定期第14d、28d,隨機處死4只動物。取大體標本進行觀察,并通過X線和組織學方法檢查牽張區(qū)新骨形成的情況,探討模型建立的方法。 二：選用成年新西蘭大白兔44只,隨機分為三組。分別為牽張組、骨折對照組和正常對照組,各20、20、4只動物。牽張組按前述方法建立下頜牽張成骨動物模型并進行牽張；骨折對照組用相同方法造成下頜骨骨折并用牽張器固定,但是不進行牽張；正常對照組取正常下頜骨組織作為對照。于不同時期處死動物,標本行免疫組織化學(immunohistochemical, IHC)染色,觀察HGF的表達及分布情況。采用半定量法對組織切片著色強度分級評分,結(jié)果采用SPSS10.0軟件包進行統(tǒng)計學處理。 結(jié)果 一：全部實驗動物的下頜骨被成功延長,X線檢查見牽張間隙逐漸由新生骨組織充填。組織學切片觀察：間歇期末,裂隙近遠中骨皮質(zhì)為骨痂覆蓋,可見擴張的新生毛細血管及軟骨樣組織形成；牽張結(jié)束,間隙內(nèi)充滿沿牽張方向排列的大量新生毛細血管及成纖維細胞,膠原纖維周圍、皮質(zhì)骨斷端和骨髓腔附近有新骨形成,新生骨小梁表面有肥大的成骨細胞；固定期第14d,牽張區(qū)骨小梁數(shù)量增多,纖維成分減少,骨小梁多數(shù)沿牽張方向平行排列,部分交織成網(wǎng)并出現(xiàn)鈣化,其間有大量新生血管,成骨細胞在新生骨小梁表面排成一層,成骨活躍；固定第28d,裂隙中央出現(xiàn)鈣化的骨小梁,周圍新生骨小梁粗大,連接成片,原骨斷端附近,不成熟的骨小梁消失,新生骨在結(jié)構上已近似于原先成熟的骨質(zhì)。牽張過程中間隙內(nèi)新骨形成方式以膜內(nèi)成骨為主,動物模型在組織學上與相關報道吻合。 二：牽張及骨折組HGF表達增加,陽性著色主要定位于內(nèi)皮細胞胞膜和胞漿；破骨細胞表達HGF僅出現(xiàn)于術后1w左右；正常對照組骨組織無陽性著色。牽張及骨折組HGF表達在術后1w開始增加,術后2～3w時達到最強,隨后表達強度下降,至術后7w時,兩組IHC染色為陰性。牽張組較骨折組HGF的表達強度大,持續(xù)時間長。 結(jié)論1.本實驗成功建立了兔下頜牽張成骨動物模型,它能夠較好的反映下頜牽張成骨過程中在不同時期牽張間隙內(nèi)新生組織的生理及病理學變化,可重復性較強。該模型可在動物下頜骨兩側(cè)施以不同干預方式,即能夠利用同一動物研究兩種不同基因或生物活性物質(zhì)對牽張成骨的影響,進行對照,可更好的滿足當前研究的需要,增加了實驗數(shù)據(jù)的可靠性,這對于進一步深入研究牽張成骨的生物學機制,提高實驗研究效率具有重要的實用價值。 2.DO和骨折過程中間充質(zhì)細胞和血管壁細胞細胞均表達HGF,而DO過程中HGF表達較強。HGF通過促進血管形成,在保證局部供養(yǎng)、促進骨再生方面具有重要作用。牽張成骨過程中,間隙內(nèi)張力的存在可能對HGF的表達具有增強作用。 【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R782

【圖文】：

1.2.3建立牽引成骨動物模型①麻醉后將動物雙側(cè)的頰部、頗下區(qū)、頸部進行備皮，消毒以后鋪洞巾;②沿著下領角的前切跡，以此作為后界，自一側(cè)頰下沿著下領下緣，切開皮膚scm。切開皮下及頸闊肌，在下領骨下緣略偏頰側(cè)，可見一條“白線”(圖l一2);③此為下領舌骨肌在下領體的附著處，沿“白線”切開到骨膜，用精細剝離子仔細將頰側(cè)骨膜掀起。④預先用裂鉆在下領下緣處打孔，準備截骨后固定牽引器所用，裂鉆的轉(zhuǎn)速控制在2000轉(zhuǎn)/min以下，用生理鹽水沖洗降溫。⑤保護好動物頰側(cè)的骨膜和軟組織，用金剛砂片將截骨處頰側(cè)和下領下緣的骨皮質(zhì)進行切開，用薄骨鑿插入裂隙，輕輕旋轉(zhuǎn)到下領體折斷，造成人工骨折，操作中盡量不要損傷下牙槽血管和舌側(cè)骨膜，依同法完成對側(cè)的手術;

⑥將離斷的下領骨用牽引器進行復位固定。⑦妥善的止血后，嚴密縫合骨膜，并分層縫合肌肉和皮膚，牽引器的固定腳由皮膚創(chuàng)口處穿出(圖1一3)。⑧牽引裝置穿出皮膚的創(chuàng)口處采用荷包縫合后，覆蓋碘仿紗條防止感染。飯側(cè)期圖1一3牽張手術結(jié)束后，縫合完成1.2.4動物術后的護理術后吧動物送回籠中，，側(cè)臥位以保證呼吸道通暢，并注意保溫。動物完全清醒以后給予切碎青飼料喂養(yǎng)2周，然后以成品復合飼料進行喂養(yǎng)。手術當天開始肌注慶大霉素2萬U和青霉素40萬U，連續(xù)5天，每天兩次。術后的第7天拆掉皮膚縫線和碘仿紗條。1.2.5牽引延長下領骨術后動物下領骨于原位固定7天，自第8天開始

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

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2 龍潔,田衛(wèi)東,鄭曉輝,李聲偉;牽張成骨對山羊下頜骨成骨細胞增殖節(jié)律的影響[J];華西口腔醫(yī)學雜志;2003年02期

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5 李繼華,王大章,胡靜,廖運茂,王虎;牽張成骨術在延長下頜骨中新骨生成方式的研究[J];中國修復重建外科雜志;2002年02期

本文編號：2712337