發(fā)布時間：2020-06-07 09:48

【摘要】：目的：采用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng)對體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞(human periodontal ligament fibroblasts, hPDLFs)施加不同時間利于細(xì)胞增殖的周期性張應(yīng)力,觀察周期性張應(yīng)力對hPDLFs增殖及結(jié)締組織生長因子(connective tissue growing factor, CTGF)表達(dá)的影響；通過檢測添加JNK、 p38MAPK、PI3K信號通路特異性抑制劑后hPDLFs表達(dá)CTGF的變化,明確各通路是否在周期性張應(yīng)力誘導(dǎo)hPDLFs表達(dá)CTGF過程中發(fā)揮作用。 方法： 1采用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng),以hPDLFs為對象構(gòu)建細(xì)胞體外培養(yǎng)-力學(xué)刺激模型。觀察細(xì)胞形態(tài)特征,繪制生長曲線,為細(xì)胞力學(xué)加載實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。 2加力組分別給予周期性張應(yīng)力刺激1h、6h、12h、24h,加載的幅度10%(每一個循環(huán)包括3s-stretch/3s-relaxation)頻率0.1Hz (6cycles/分),并以未加力組為實(shí)驗(yàn)對照組。應(yīng)用CCK-8法(Cell Counting Kit-8)檢測hPDLFs增殖的情況；應(yīng)用ELISA法檢測培養(yǎng)細(xì)胞分泌到上清液中的CTGF蛋白；應(yīng)用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞CTGF mRNA的表達(dá)。 3對應(yīng)用JNK信號通路特異性抑制劑SP600125、p38MAPK信號通路特異性抑制劑SB203580、PI3K信號通路特異性抑制劑LY294002預(yù)處理的細(xì)胞,分別加力1h、6h、12h、24h,與未加抑制劑的加力1h、6h、12h、24h的細(xì)胞作為對照組,檢測CTGF的表達(dá)。 結(jié)果： 1體外培養(yǎng)獲得了典型且穩(wěn)定的hPDLFs,適用于對hPDLFs進(jìn)行力學(xué)加載實(shí)驗(yàn)。 2加載周期性張應(yīng)力組與對照組相比較,在周期性張應(yīng)力加載1h hPDLFs開始增殖,6h hPDLFs增殖比較明顯,12h hPDLFs增殖達(dá)高峰,24h hPDLFs增殖開始降低；加載周期性張應(yīng)力組與對照組相比較,1h hPDLFs表達(dá)CTGF開始增強(qiáng)、6h表達(dá)明顯增強(qiáng),12h hPDLFs表達(dá)CTGF達(dá)最高峰值、24h hPDLFs表達(dá)CTGF開始下降。 3加入JNK信號通路特異性抑制劑后,hPDLFs表達(dá)CTGF出現(xiàn)下降；而加入p38MAPK信號通路和P13K信號通路的特異性抑制劑后CTGF表達(dá)未發(fā)生明顯改變。 結(jié)論： 1加載幅度10%,頻率0.1Hz的周期性張應(yīng)力可以誘導(dǎo)hPDLFs增殖,hPDLFs并開始表達(dá)分泌CTGF。 2在一定時間范圍內(nèi),周期性張應(yīng)力引起CTGF mRNA和蛋白水平的表達(dá)呈時間依賴性升高；其后隨著時間的延長,CTGF的表達(dá)則開始下降。 3周期性張應(yīng)力通過JNK通路的介導(dǎo)促進(jìn)了hPDLFs對CTGF的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R780.2

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本文編號：2701230