【摘要】：目的：采用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng)對(duì)體外培養(yǎng)的人牙周膜成纖維細(xì)胞(human periodontal ligament fibroblasts, hPDLFs)施加不同時(shí)間利于細(xì)胞增殖的周期性張應(yīng)力,觀察周期性張應(yīng)力對(duì)hPDLFs增殖及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growing factor, CTGF)表達(dá)的影響；通過(guò)檢測(cè)添加JNK、 p38MAPK、PI3K信號(hào)通路特異性抑制劑后hPDLFs表達(dá)CTGF的變化,明確各通路是否在周期性張應(yīng)力誘導(dǎo)hPDLFs表達(dá)CTGF過(guò)程中發(fā)揮作用。 方法： 1采用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng),以hPDLFs為對(duì)象構(gòu)建細(xì)胞體外培養(yǎng)-力學(xué)刺激模型。觀察細(xì)胞形態(tài)特征,繪制生長(zhǎng)曲線,為細(xì)胞力學(xué)加載實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。 2加力組分別給予周期性張應(yīng)力刺激1h、6h、12h、24h,加載的幅度10%(每一個(gè)循環(huán)包括3s-stretch/3s-relaxation)頻率0.1Hz (6cycles/分),并以未加力組為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。應(yīng)用CCK-8法(Cell Counting Kit-8)檢測(cè)hPDLFs增殖的情況；應(yīng)用ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞分泌到上清液中的CTGF蛋白；應(yīng)用熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞CTGF mRNA的表達(dá)。 3對(duì)應(yīng)用JNK信號(hào)通路特異性抑制劑SP600125、p38MAPK信號(hào)通路特異性抑制劑SB203580、PI3K信號(hào)通路特異性抑制劑LY294002預(yù)處理的細(xì)胞,分別加力1h、6h、12h、24h,與未加抑制劑的加力1h、6h、12h、24h的細(xì)胞作為對(duì)照組,檢測(cè)CTGF的表達(dá)。 結(jié)果： 1體外培養(yǎng)獲得了典型且穩(wěn)定的hPDLFs,適用于對(duì)hPDLFs進(jìn)行力學(xué)加載實(shí)驗(yàn)。 2加載周期性張應(yīng)力組與對(duì)照組相比較,在周期性張應(yīng)力加載1h hPDLFs開(kāi)始增殖,6h hPDLFs增殖比較明顯,12h hPDLFs增殖達(dá)高峰,24h hPDLFs增殖開(kāi)始降低；加載周期性張應(yīng)力組與對(duì)照組相比較,1h hPDLFs表達(dá)CTGF開(kāi)始增強(qiáng)、6h表達(dá)明顯增強(qiáng),12h hPDLFs表達(dá)CTGF達(dá)最高峰值、24h hPDLFs表達(dá)CTGF開(kāi)始下降。 3加入JNK信號(hào)通路特異性抑制劑后,hPDLFs表達(dá)CTGF出現(xiàn)下降；而加入p38MAPK信號(hào)通路和P13K信號(hào)通路的特異性抑制劑后CTGF表達(dá)未發(fā)生明顯改變。 結(jié)論： 1加載幅度10%,頻率0.1Hz的周期性張應(yīng)力可以誘導(dǎo)hPDLFs增殖,hPDLFs并開(kāi)始表達(dá)分泌CTGF。 2在一定時(shí)間范圍內(nèi),周期性張應(yīng)力引起CTGF mRNA和蛋白水平的表達(dá)呈時(shí)間依賴性升高；其后隨著時(shí)間的延長(zhǎng),CTGF的表達(dá)則開(kāi)始下降。 3周期性張應(yīng)力通過(guò)JNK通路的介導(dǎo)促進(jìn)了hPDLFs對(duì)CTGF的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R780.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫蘊(yùn)偉,袁耀宗;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子及其在胰腺纖維化中的作用機(jī)制[J];胰腺病學(xué);2003年02期

2 李光明,李定國(guó);結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與肝纖維化[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).消化系疾病分冊(cè);2004年04期

3 肖云;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與腎纖維化[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).泌尿系統(tǒng)分冊(cè);2004年03期

4 李_g,呂青,王繼峰,牛建昭;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與腎臟纖維化[J];生命的化學(xué);2003年03期

5 張海燕,李幼姬;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與腎纖維化[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).內(nèi)科學(xué)分冊(cè);2003年08期

6 黃文輝;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與糖尿病腎病[J];醫(yī)學(xué)綜述;2003年10期

7 朱雄偉;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與乳腺癌及其血管形成的關(guān)系[J];中國(guó)癌癥雜志;2004年01期

8 陳敏生,區(qū)彩文,張立建,劉啟才,劉世明,黃少華;CTGF反義寡核苷酸對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞增殖、膠原合成的抑制效應(yīng)[J];中國(guó)病理生理雜志;2005年02期

9 朱雄偉;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與乳腺癌的研究進(jìn)展[J];實(shí)用癌癥雜志;2003年05期

10 全燕,夏前明;結(jié)締組織生長(zhǎng)因子與肺纖維化及呼吸功能[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年36期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 沈彤;于均峰;周承藩;張學(xué)軍;朱啟星;;三氯乙烯通過(guò)線粒體途徑誘導(dǎo)BALB/c裸鼠皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞調(diào)亡[A];中國(guó)毒理學(xué)會(huì)第二屆全國(guó)中青年學(xué)者科技論壇會(huì)議論文集[C];2007年

2 李霞;豐平;文朝陽(yáng);劉淑紅;錢(qián)英;王學(xué)江;;方劑槲芪散及君藥槲寄生提取物對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)第十二屆內(nèi)科肝膽病學(xué)術(shù)會(huì)議暨第四次國(guó)家中醫(yī)肝病重點(diǎn)專(zhuān)科協(xié)作組學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

3 陶靈;李世榮;劉劍毅;戴霞;李U，

本文編號(hào)：2701230