【摘要】：[目的]體外分離培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞(human periodontal ligament fibroblasts, hPDLFs)。探討體外不同應(yīng)力刺激對hPDLFs與正畸牙周組織改建相關(guān)的細(xì)胞因子基質(zhì)金屬蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1, MMP-1)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表達(dá)的影響。進(jìn)一步研究正畸牙移動過程中牙周組織改建的機(jī)械生物力學(xué)機(jī)制。 [方法]采用改良組織塊貼附法體外培養(yǎng)hPDLFs并進(jìn)行細(xì)胞傳代,通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)及免疫組織化學(xué)方法對其進(jìn)行鑒定,為后續(xù)應(yīng)力實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞。運(yùn)用Forcel四點(diǎn)彎曲細(xì)胞力學(xué)加載儀對hPDLFs分別施加動態(tài)張、壓應(yīng)力(強(qiáng)度5000μstrain,頻率0.5Hz)。按總的加力時(shí)間分為0、2、6、12h 4個(gè)組。利用免疫熒光技術(shù)、激光共聚焦顯微鏡以及流式細(xì)胞儀檢測hPDLFs內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)堿性磷酸酶(ALP)以及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)變化；利用Western blot方法檢測動態(tài)張、壓應(yīng)力對hPDLFs MMP-1蛋白表達(dá)的影響。 [結(jié)果]采用改良組織塊貼附法成功培養(yǎng)出原代牙周膜細(xì)胞,并證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞是中胚層來源的hPDLFs。正常hPDLFs均表達(dá)MMP-1、ALP及VEGF。動態(tài)壓應(yīng)力可導(dǎo)致hPDLFs MMP-1的表達(dá)在加力6h組升高,ALP的表達(dá)在加力2h組降低。動態(tài)張應(yīng)力可導(dǎo)致hPDLFs MMP-1的表達(dá)在加力2h組升高,ALP的表達(dá)在加力6h組降低。動態(tài)張、壓應(yīng)力均可下調(diào)hPDLFs VEGF的表達(dá)；動態(tài)張應(yīng)力作用12h后hPDLFs VEGF的表達(dá)回升至對照組水平。 [結(jié)論]本實(shí)驗(yàn)采用改良組織塊貼附法成功培養(yǎng)hPDLFs。MMP-1、ALP及VEGF參與hPDLFs機(jī)械應(yīng)力信號傳導(dǎo)過程,上述細(xì)胞因子表達(dá)變化與體外應(yīng)力性質(zhì)及加力時(shí)間存在相關(guān)性。MMP-1及ALP可能作為相關(guān)因子參與正畸牙移動牙周組織改建過程。hPDLFs對動態(tài)張應(yīng)力可能適應(yīng)較快并恢復(fù)VEGF的表達(dá)而加快牙周組織的改建。
【圖文】：

結(jié)果.人牙周膜成纖維細(xì)胞的生長情況原代培養(yǎng)的細(xì)胞最快爬出時(shí)間為7天，鏡下見活性組織塊貼壁牢固，周圍透亮。細(xì)胞芒刺樣由組織塊向四周放射狀生長，靠近組織塊處細(xì)胞密集，細(xì)胞形態(tài)不清。細(xì)胞團(tuán)外緣細(xì)胞單層生長，形態(tài)清晰，呈長梭形，偶見4個(gè)細(xì)胞突起，胞核清晰，呈類圓或橢圓形�？梢娚贁�(shù)多角形細(xì)胞。傳代后4小時(shí)見懸浮細(xì)胞重新貼壁，呈短梭形。18小時(shí)后恢復(fù)長梭形，細(xì)胞隨著數(shù)量的增加呈漩渦狀、放射狀生長。細(xì)胞生長4至7天后可以再次傳代，一般傳至第3代基本看不到多角形細(xì)胞。第5一10代hPDLFS性質(zhì)穩(wěn)定，形態(tài)一致，胞質(zhì)均勻透亮，生長狀況良好，培養(yǎng)至第10代以后細(xì)胞生長時(shí)間延長，細(xì)胞生長至培養(yǎng)瓶的70%一80%需7天左右，胞質(zhì)出現(xiàn)顆粒，有老化趨勢。(圖l)，一﨑式處

昆明醫(yī)學(xué)院2008級頓}研究生學(xué)位論文2.人牙周膜成纖維細(xì)胞鑒定細(xì)胞波形絲蛋白(vimentin)染色陽性，細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)棕黃色(圖ZA、B)，符合中胚層來源的成纖維細(xì)胞特征;細(xì)胞角蛋白(Cytokeratill)染色陰性(圖ZC、D)，，表明無外胚層來源的細(xì)胞。上述結(jié)果顯示，本實(shí)驗(yàn)成功獲得中胚層來源的hPDLFs。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R783.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 曹陽;鄭翼;陳揚(yáng)熙;羅頌椒;;機(jī)械應(yīng)力下成骨細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶ERK1/2的早期變化[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年18期

2 余占海;張國英;張小恒;趙健雄;杜建東;楊倩;;玻片覆蓋組織塊法原代培養(yǎng)人牙周膜成纖維細(xì)胞及其生物活性的觀察[J];廣東醫(yī)學(xué);2007年09期

3 史建陸;正畸牙移動牙周膜微循環(huán)變化研究[J];國外醫(yī)學(xué).口腔醫(yī)學(xué)分冊;1999年01期

4 張麗;王永;張軍梅;侯豫;吳承龍;王文秀;;體外培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞方法的探討[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2008年05期

5 周繼祥,趙志河,譚理軍,林珠;體外不同張應(yīng)力對人牙周膜成纖維細(xì)胞增殖活性的影響[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年04期

6 張明珠,雷雅燕,劉曉,朱紅,歐炯光;原代人牙周膜成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)及培養(yǎng)方法的改進(jìn)[J];昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2004年01期

7 李小彤,張丁,傅民魁;體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)胞成骨樣細(xì)胞表型特征的研究[J];口腔正畸學(xué);2001年03期

8 龍潔,田衛(wèi)東,鄭曉輝,樊瑜波,李聲偉;張應(yīng)力對成骨樣細(xì)胞MG-63增殖狀態(tài)的影響[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2004年06期

9 張曉東;宋九余;李響;董紀(jì)軍;李永明;林珠;;周期性牽張力對人牙周膜細(xì)胞MMP-1 mRNA表達(dá)的影響[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2009年01期

10 張曉東,林珠,李永明,陳曦;大鼠牙齒移動牙周組織中Ⅰ型膠原和MMP-1及TIMP-1的表達(dá)[J];中國美容醫(yī)學(xué);2005年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 孫曉琳;骨皮質(zhì)切開術(shù)對大鼠牙移動速率及牙周膜膠原代謝影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年

本文編號：2689015