【摘要】：髁突是顳頜關(guān)節(jié)的重要組成部分之一，其表層覆蓋著由纖維層、增殖層和軟骨層組成的纖維軟骨，由于顳頜關(guān)節(jié)特殊的解剖結(jié)構(gòu)和生理功能特點(diǎn)，使得髁突軟骨細(xì)胞(mandibular condylar chondrocytes，MCCs)在具有一般軟骨細(xì)胞共性的同時(shí)，又在形態(tài)、增殖分化、基質(zhì)合成和分泌等方面表現(xiàn)出獨(dú)有的特征。隨著細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，近年國(guó)內(nèi)外已成功地培養(yǎng)了小鼠、兔等多種動(dòng)物和人的髁突軟骨細(xì)胞，對(duì)其生物學(xué)特性有了一定的認(rèn)識(shí)。由于髁突表層纖維軟骨的組織特異性，體外培養(yǎng)的MCCs實(shí)際上是處于不同分化階段軟骨細(xì)胞的混合體，常常表現(xiàn)出不穩(wěn)定的表型特征，這為研究MCCs生物學(xué)特征帶來(lái)了一定困難。近年基因轉(zhuǎn)染技術(shù)發(fā)展迅速，一些學(xué)者嘗試把某些癌基因的全部或片段導(dǎo)入一些具有有限生命的細(xì)胞，獲得具有穩(wěn)定表型的永生化細(xì)胞系，以便對(duì)目的細(xì)胞進(jìn)行長(zhǎng)期的研究。 本研究采用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染的方法，將SV40大T抗原基因片段導(dǎo)入原代培養(yǎng)的MCCs，對(duì)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞進(jìn)行克隆篩選，首次建立了具有穩(wěn)定軟骨表型的、永生化兔髁突軟骨細(xì)胞系。 研究結(jié)果簡(jiǎn)述如下： 根據(jù)SV40大T抗原基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，選擇適當(dāng)?shù)南拗菩詢(xún)?nèi)切酶，經(jīng)過(guò)PUC19亞克隆，將大T抗原的基因片段導(dǎo)入pLN系列的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pLN-M。重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)化、鑒定、大量提取和純化后，采用脂
【圖文】：

2.0kb32圖1.1.2pNL/sv40酶切鑒定結(jié)果:DNA/Hind111mkaror(依次為23.1，，9.4，6.5，4.3，2.3，2.okb)2:EeoRI和BmaHI雙酶切(5.3kb，4，3kb)3:KPnl單酶切(4.skb

2341..42Weestmblot檢測(cè)T抗原的表達(dá)1:COS一7;2:轉(zhuǎn)基因細(xì)胞(克隆‘A21):3:轉(zhuǎn)基因細(xì)胞(克隆D53);4:MCCsT抗原永生化的細(xì)胞常表現(xiàn)出T抗察到了T抗原在轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的胞核中恒T抗原的表達(dá)作了進(jìn)一步的證實(shí)。生化中起著重要作用14間。人們發(fā)現(xiàn)T抗，與染色質(zhì)相結(jié)合并且被緊密地束縛在密連接在膜的脂質(zhì)而錨著于細(xì)胞表面。T泌的增加，從而使細(xì)胞具有無(wú)限增殖的能引起一連串的變化vIl。另外，大T抗多個(gè)環(huán)節(jié)，包括與p53、p300、Rb以
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2000
【分類(lèi)號(hào)】：R78

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本文編號(hào)：2686493