E-cadherin與Podoplanin免疫組化雙染法在口腔鱗狀細胞早期浸潤癌病理診斷中的應(yīng)用

發(fā)布時間：2020-05-25 23:21

【摘要】：口腔癌是發(fā)生在人體組織中的一種較常見的惡性腫瘤。據(jù)統(tǒng)計,全球每年新增口腔癌患者約30萬人,死亡人數(shù)約15萬人,中國每年新增患者約48萬人,死亡人數(shù)約22萬人。世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計結(jié)果顯示:口腔癌的發(fā)病率在人類可知的惡性腫瘤中排名第六位,而口腔鱗狀細胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)作為口腔頜面部惡性腫瘤最為常見的惡性腫瘤之一,約占所有口腔頜面部惡性腫瘤的80%,且近年來的發(fā)生率呈逐年上升的趨勢�？谇击[狀細胞癌具有很強的侵襲性,很容易向周圍組織侵襲,故患者5年生存率僅為50%左右,因此早期發(fā)現(xiàn)并診斷口腔鱗狀細胞癌對患者的治療及預(yù)后有重要意義。在致瘤因素的作用下,口腔鱗狀上皮可以發(fā)生從鱗狀上皮不典型增生到鱗狀細胞癌的變化,這是腫瘤發(fā)展的一個重要過程。根據(jù)細胞的異型程度、異型細胞所累及上皮層的層次及有無浸潤,分為正常口腔鱗狀上皮(normal oral epithelial,NOE)、口腔鱗狀上皮不典型增生(oral epithelial dysplasia,OED)、口腔鱗狀上皮原位癌(squamous carcinoma in situ,SCIS)及OSCC。而OED與早期OSCC在臨床癥狀上并無明顯區(qū)別,但其治療方法卻有很大差異,因此在活檢標(biāo)本中確定組織是否為OSCC顯得尤其重要。但是在臨床病理診斷工作中,常常因為組織切面等原因,對OED和OSCC的診斷出現(xiàn)鑒別困難的情況,這就要求人們通過不懈的探索,尋求適宜的方法來對疾病的診斷進行協(xié)助判斷。近期的研究表明,腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移與上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-to-mesenchymal transitions,EMT)有很大的聯(lián)系。E-cadherin是EMT過程中的重要指標(biāo)。大量的研究資料證明,E-cadherin蛋白能夠抑制腫瘤細胞的侵襲行為,E-cadherin蛋白表達的減少是一種惡性標(biāo)志,它在鱗狀細胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)中或SCC的侵襲性周邊表達降低,對OSCC的診斷有重要意義。Podoplanin可以通過改變腫瘤細胞的肌動蛋白細胞骨架,或促進腫瘤細胞形成偽足,參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。目前已在多個系統(tǒng)多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn)了podoplanin表達的現(xiàn)象,包括OSCC。E-cadherin表達的缺失被認為是腫瘤演進過程中的一個重要步驟,而podoplanin卻可以在缺乏鈣黏蛋白轉(zhuǎn)變的情況下誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生。兩者的協(xié)同作用是腫瘤發(fā)生、發(fā)展的重要途徑。為給臨床病理醫(yī)師提供更加精準(zhǔn)的方法,本課題采用免疫酶組織化學(xué)雙重染色(免疫組化雙染)的方法,檢測口腔不同病變鱗狀上皮組織中E-cadherin和podoplanin的表達情況,探索二者的免疫組化雙染法在口腔鱗狀上皮不同類型病變的診斷及鑒別診斷中的價值,判斷其是否有助于早期浸潤癌的判斷。目的檢測E-cadherin和podoplanin在口腔鱗狀上皮不同類型病變中的表達情況,探討二者的免疫組化雙染方法在口腔鱗狀細胞早期浸潤癌病理診斷中的應(yīng)用價值。材料和方法1.篩選2011年1月—2014年12月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔黏膜組織214例。經(jīng)病理診斷,包含正常鱗狀上皮組織(NOE)30例,不典型增生組織(OED)66例,原位癌(SCIS)組織45例,鱗狀細胞癌(OSCC)組織73例。2.運用免疫組織化學(xué)雙染法檢測所有組織中E-cadherin和podoplanin的表達。3.篩選出17例在原病理診斷中對有無早期浸潤現(xiàn)象診斷困難的口腔鱗狀上皮病變的病例,運用上述檢測方法檢測可疑浸潤區(qū)的兩種指標(biāo)的共同表達情況,并對這些病例進行隨訪,追蹤病變進展情況。4.統(tǒng)計學(xué)處理:使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 21.0進行數(shù)據(jù)分析和χ~2檢驗,以α=0.05為檢驗水準(zhǔn),當(dāng)P0.05時認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。當(dāng)進行多組(n≥3組)率的兩兩比較時,用Bonferroni方法校正檢驗水準(zhǔn)α,即P2α/n(n-1)時認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.在免疫組化雙染切片中,93.3%的NOE和65.2%的OED組織中E-cadherin正常表達的同時podoplanin表達陰性;在35.6%的SICS組織中E-cadherin正常表達的同時podoplanin表達陽性;在54.8%的OSCC組織中出現(xiàn)E-cadherin表達降低的同時podoplanin表達陽性。從上述實驗結(jié)果可以看出,隨著病變的加重,E-cadherin表達減弱而podoplanin陽性表達的概率逐步增加。4組間進行比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=106.976,P0.05)。2.用此免疫組化雙染實驗方法對以上17例鱗狀上皮原位癌伴可疑浸潤的樣本進行檢測,其中有5例(29.4%)出現(xiàn)了與OSCC一致的表現(xiàn),對這17例進行隨訪或再次活檢發(fā)現(xiàn)以上5例均確診為OSCC。而可疑浸潤區(qū)的著色與其它組織的明顯不同,可能有助于對早期OSCC的快速識別。3.在不典型增生伴局灶癌變的樣本中,癌變處組織的免疫組化雙染結(jié)果出現(xiàn)E-cadherin正常表達的同時podoplanin表達陽性或E-cadherin表達降低的同時podoplanin表達陽性,這與未癌變處組織的免疫組化雙染表達明顯不同。4.統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)E-cadherin在OED和OSCC中著色部位的不同具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ~2=13.348,P0.0167),即在OED中多在細胞膜中表達,在OSCC中多呈細胞膜表達降低或陰性的現(xiàn)象;但在細胞質(zhì)中的表達,三組之間并無顯著的差異。結(jié)論1.采用免疫組化雙染的方法聯(lián)合檢測E-cadherin和podoplanin在口腔鱗狀上皮病變中表達,有助于不同鱗狀上皮病變的病理診斷及鑒別。2.聯(lián)合E-cadherin和podoplanin的免疫組化雙染法可提高早期浸潤性鱗狀細胞癌及鱗狀上皮不典型增生伴局灶癌變的確診率。3.免疫組化雙染的方法有助于協(xié)助臨床病理醫(yī)師更快速地定位可疑浸潤區(qū),提升診斷效率。
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