【摘要】：目的：使用生物大分子修飾鈦表面，構(gòu)建具有生物活性的種植體，是目前鈦表面處理研究的熱點(diǎn)之一。采用層層自組裝技術(shù)(Layer-by-Layer self-assemble technique,LbL)在鈦表面組裝肝素-殼聚糖涂層，形成自組裝多層聚電解質(zhì)復(fù)合物（polyelectrolyte complex, PEC）薄膜，同時(shí)裝載具有趨化誘導(dǎo)作用的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(stromal ce11derived fact-1，SDF-1)，提高鈦表面生物涂層中生物活性分子的含量和實(shí)現(xiàn)其緩釋效能，改善鈦種植體的生物活性，更好的促進(jìn)骨愈合。 方法：首先對(duì)鈦表面打磨、拋光，用丙酮、無(wú)水乙醇、蒸餾水超聲清洗干燥后，再用氫氧化鈉（NaOH）處理鈦基材，獲得多孔、負(fù)電荷的鈦表面，然后吸附一層帶正電荷的多聚賴氨酸（PLL），，再將鈦片依次浸泡在含有SDF-1的肝素混合溶液和殼聚糖溶液中，交替、反復(fù)進(jìn)行，形成肝素-殼聚糖的涂層，在鈦表面構(gòu)建基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)的趨化誘導(dǎo)生物界面。將上述處理后的Ti片分組分別放入含有生理鹽水1.5ml EP管中，按照預(yù)先設(shè)置的時(shí)間，設(shè)置1天、3天、5天、7天共4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每次給每組EP管中都加入1ml生理鹽水，按照設(shè)置的時(shí)間點(diǎn)收集并更換新的生理鹽水，并將所有收集液冷凍存放。用酶聯(lián)免疫技術(shù)（ELISA）檢測(cè)SDF-1釋放量，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用EXCEL繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)。 結(jié)果：1）掃描電鏡（SEM）觀察NaOH處理的鈦表面呈均勻的微納米的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。涂層后納米顆粒狀的肝素-殼聚糖分子均勻地分布在鈦表面。涂層在生理鹽水浸泡7天后，掃描電鏡（SEM）觀察涂層分子依然存在，并保持其結(jié)構(gòu)的完整性，說(shuō)明其相對(duì)的穩(wěn)定性。 2）測(cè)得鈦涂層各組不同釋放時(shí)間點(diǎn)的SDF-1釋放濃度。經(jīng)單因素方差分析，4組樣本在4個(gè)緩釋時(shí)間點(diǎn)釋放濃度測(cè)量值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別,F=1.139,P=0.582。各天之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，F(xiàn)=1.644,P=0.231；各組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，F(xiàn)=0.689,P=0.576。 結(jié)論：1）采用層層自組裝技術(shù)，將含有SDF-1的肝素、殼聚糖通過(guò)靜電相互作用吸附在鈦表面，通過(guò)掃描電鏡（SEM）觀察得出，鈦表面的含有SDF-1的肝素、殼聚糖涂層獲得成功制備。 2）用酶聯(lián)免疫技術(shù)（ELISA）檢測(cè)SDF-1釋放量得出，層層自組裝方法可成功的將SDF-1構(gòu)建在鈦表面，而且SDF-1能夠?qū)崿F(xiàn)緩釋。
【圖文】：

方法1 層層自組裝試驗(yàn)方法原理層層自組裝原理是基于聚電解質(zhì)陰陽(yáng)離子所帶正負(fù)電荷間相互作用的一超分子技術(shù)。該技術(shù)的主要特點(diǎn)是在表面荷電的基材表面通過(guò)靜電相互地吸附上帶相反電荷的聚電解質(zhì)陰陽(yáng)離子。因此，它具有如下優(yōu)點(diǎn)：第分子的選擇范圍廣泛。可以為合成的聚電解質(zhì),也可以是具有兩性的生物子，細(xì)胞外基質(zhì)就是自組裝形成的天然超分子體系；第二，制備工藝簡(jiǎn)可選擇性交替浸沒(méi)技術(shù)可實(shí)現(xiàn)在材料表面組裝分子，圖 1 為自組裝過(guò)程第三，制備條件溫和,可在常溫水溶液中進(jìn)行，可以保證生物分子具有維性的天然構(gòu)像。

該方法適用的基體材料種類(lèi)多，對(duì)基體材料的體型結(jié)有復(fù)雜體型結(jié)構(gòu)的裝置和材料上實(shí)現(xiàn)。因此，該技術(shù)在生中得到廣泛的應(yīng)用。研究中，聚賴氨酸、殼聚糖、SDF-1在pH＜7條件下帶正電水溶液中會(huì)自動(dòng)實(shí)現(xiàn)分子的組裝進(jìn)而構(gòu)建裝載SDF-1的涂層殼聚糖和肝素會(huì)逐漸降解，進(jìn)而可以緩慢釋放SDF-1，趨化酸[28](PLL)是賴氨酸聚合形成的聚電解質(zhì)，賴氨酸R基上帶在水溶液中帶正電。過(guò)PLL中所含的-COOH基團(tuán)與Ti表面的Ti-OH發(fā)生脫水反應(yīng)定于材料表面,從而將其活化，構(gòu)建正電荷層。如圖 2所示
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R783

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2676067