【摘要】：目的： 探究體外青蒿琥酯(ART)作用于人腺樣囊性癌NACC細(xì)胞系后對該細(xì)胞侵襲、凋亡的影響；探究體內(nèi)ART對裸小鼠NACC上頜竇移植瘤生長抑制作用。探討ART抑制NACC細(xì)胞具體的相關(guān)作用機(jī)制,抑制效果及作為抗腫瘤藥物的臨床的應(yīng)用前景。 方法： (1)NACC細(xì)胞系經(jīng)ART干預(yù)后,分為空白對照組,25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml ART共4組。吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)對NACC細(xì)胞染色,觀察ART是否會(huì)引起NACC細(xì)胞的凋亡,并觀察經(jīng)以上不同濃度ART干預(yù)后NACC細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變,計(jì)算各組NACC細(xì)胞凋亡率。 (2) Transwell小室法測定空白組,25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml ART組NACC細(xì)胞的跨膜穿過細(xì)胞數(shù),以結(jié)果數(shù)據(jù)代表各組細(xì)胞的侵襲能力。 (3) NACC細(xì)胞經(jīng)ART干預(yù)后,提取各組NACC細(xì)胞RNA,熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time qPCR)法測定NACC細(xì)胞中VEGF目的基因的mRNA相對表達(dá)量。 (4)免疫細(xì)胞化學(xué)法對經(jīng)ART干預(yù)后的NACC細(xì)胞胞漿中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)的蛋白進(jìn)行染色,經(jīng)Image-Pro Plus6.0軟件分析得出各組的VEGF相對蛋白表達(dá)量。 (5)建立NACC裸鼠上頜竇原位移植瘤模型,成瘤后隨機(jī)分成生理鹽水組,ART200mg/kg組、ART400mg/kg組、DDP2.0mg/kg組共4組。藥物組每只隔日腹腔給藥注射ART和DDP一次,共計(jì)10次；對照組給藥等量生理鹽水。測量各組裸鼠移植瘤體積；Micro-CT法觀察移植瘤與周圍組織關(guān)系。HE染色觀察腫瘤組織病理改變及對周圍組織的侵犯。 結(jié)果： (1)經(jīng)AO/EB染色,與空白對照組對比觀察,各ART組均能觀察到凋亡細(xì)胞,25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml ART組的NACC細(xì)胞凋亡率分別為7.73%,16.24%,30.45%。各ART組與對照組比較差異具有顯著性(P0.05), ART組間兩兩比較差異具有顯著性(P0.01)。 (2)ART各組跨膜細(xì)胞數(shù)隨著ART濃度增高而逐漸減少,空白組124.31±12.84,25μg/ml ART組97.46±11.13,50μg/ml ART組83.72±10.59,100μg/ml ART組61.18±8.93。各ART組與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),ART組間比較除ART25μg/ml組與ART50μg/ml組差異不顯著(P0.05)其余差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (3)各ART組VEGF目的基因的mRNA相對表達(dá)量隨著ART濃度增高而逐漸減低,表達(dá)量由高到低分別為0.3186±0294,0.2994±0.0471,0.2812±0.0258,0.2415±0.0341,明顯低于空白對照組(1.0000),差異具有顯著性(P0.01)。 (4)隨著ART濃度增高,各ART組胞漿中VEGF的蛋白陽性表達(dá)逐漸降低,平均吸光密度值(MOD)空白組為0.2367±0.0631,ART組分別為0.2012±0.0809,0.1679±0.0781,0.0862±0.0034,0.0612±0.0093。各ART組與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),100μg/ml ART組與200μg/ml ART組差異不顯著(P0.05),其余ART組間比較差異顯著(P0.05)。 (5)生理鹽水組腫瘤體積64.72±6.32mm3, ART200mg/kg組66.19±5.58mm3, ART400mg/kg組49.01±5.86mm3,DDP組44.53±6.51mm3, ART400mg/kg組和DDP組與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： (1)青蒿琥酯可以有效地抑制腺樣囊性癌NACC細(xì)胞系的體外增殖、克隆、侵襲能力,促進(jìn)NACC細(xì)胞的凋亡,其機(jī)制有可能是通過下調(diào)NACC細(xì)胞中VEGF的表達(dá)。 (2)一定濃度的青蒿琥酯可以抑制裸小鼠上頜竇原位移植瘤的生長。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.87

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2665513