【摘要】：目的：面頜部的肌肉組織在牙頜面畸形的發(fā)生、發(fā)展、治療和療效維持中起著非常重要的作用,其結(jié)構(gòu)和功能可隨外界刺激的改變發(fā)生適應(yīng)性的變化。這正是正畸醫(yī)生在臨床上通過(guò)矯形力調(diào)控面頜部肌肉組織改建的基礎(chǔ)。在此過(guò)程中,應(yīng)力如何被細(xì)胞感受并傳遞至細(xì)胞內(nèi)環(huán)境,從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生一系列生物學(xué)效應(yīng)的確切機(jī)制仍處于探索階段。目前對(duì)功能矯形的研究多建立在組織形態(tài)學(xué)、組織化學(xué)、生物力學(xué)特性和收縮功能改變的基礎(chǔ)上,而對(duì)機(jī)械應(yīng)力下面頜部肌肉組織適應(yīng)性改建的細(xì)胞及分子機(jī)制缺乏進(jìn)一步的研究。本研究擬在成功構(gòu)建成肌細(xì)胞體外培養(yǎng)-力學(xué)刺激模型的基礎(chǔ)上,探討周期性張應(yīng)力對(duì)成肌細(xì)胞凋亡的影響,Caspase-3在應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞凋亡中的作用以及調(diào)控機(jī)制,從而闡明機(jī)械應(yīng)力作用下面頜肌細(xì)胞適應(yīng)性改建的分子調(diào)控機(jī)制,這將幫助口腔臨床醫(yī)生采用不同的方法誘導(dǎo)或者調(diào)控肌肉改建,具有重要的指導(dǎo)意義。 方法：以體外培養(yǎng)的大鼠成肌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)成功構(gòu)建成肌細(xì)胞體外培養(yǎng)-力學(xué)刺激模型,使用多通道細(xì)胞牽張應(yīng)力加載系統(tǒng),對(duì)待測(cè)的細(xì)胞持續(xù)加載1h、6h、12h、24h的周期性張應(yīng)力,其中力值為15%的細(xì)胞形變,頻率為10cycles/min,設(shè)不加力組為對(duì)照組,使用電子透射顯微鏡,Hoechst熒光染色從形態(tài)學(xué)上觀察不同持續(xù)時(shí)間的張應(yīng)力對(duì)細(xì)胞凋亡的影響并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞的凋亡率,通過(guò)Caspase-3活性檢測(cè)來(lái)檢測(cè)不同組之間Caspase-3的活性,通過(guò)RT-PCR檢測(cè)周期性張應(yīng)力作用下不同組之間的Caspase-3的作用底物PARP的表達(dá)變化,通過(guò)WesternBlotting檢測(cè)周期性張應(yīng)力作用下不同組之間的Caspase-3, PARP蛋白原態(tài)與活化態(tài)的表達(dá)變化,然后應(yīng)用Caspase-3特異性抑制劑z-DEVD-fmk來(lái)明確Caspase-3在應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞中的作用。應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.電鏡,Hoechst熒光染色,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果均顯示本實(shí)驗(yàn)所施加的15%,10cycles/min的周期性張應(yīng)力可成功誘導(dǎo)大鼠成肌細(xì)胞的細(xì)胞凋亡,并且凋亡率隨加力時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高,在24h內(nèi)加力24h組的凋亡率最高； 2. Caspase-3活性檢測(cè)結(jié)果顯示,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),Caspase-3的活性在逐漸升高,RT-PCR結(jié)果顯示,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),Caspase-3的作用底物PARP的表達(dá)量降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 3. Western Blotting結(jié)果顯示,隨著加力時(shí)間的延長(zhǎng),Caspase-3及其作用底物PARP的原態(tài)表達(dá)逐漸降低,Caspase-3, PARP活化態(tài)的表達(dá)逐漸升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)； 4.加力24h組加入Caspase-3特異性抑制劑z-DEVD-fmk后再對(duì)細(xì)胞施加周期性張應(yīng)力,成肌細(xì)胞的凋亡率以及Caspase-3的活性降低,Caspase-3, PARP活化態(tài)的表達(dá)逐漸降低,Caspase-3及其作用底物PARP的原態(tài)表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1.應(yīng)力介導(dǎo)的成肌細(xì)胞凋亡參與了功能矯形狀態(tài)下面頜肌細(xì)胞的適應(yīng)性改建。 2. Caspase-3在這一過(guò)程中發(fā)揮了重要作用
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R783.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2662474