【摘要】：齲齒嚴(yán)重威脅人類的健康并且發(fā)病率極高,齲齒會(huì)引發(fā)牙周炎,引起心血管疾病、糖尿病、敗血癥等并發(fā)癥。目前治療齲齒的主要方法是物理填充,但是該方法給患者帶來極大的痛苦,并且并不能從生理上逆轉(zhuǎn),因此人類牙齒再生是一項(xiàng)非常具有市場價(jià)值、社會(huì)效益和應(yīng)用前景的研究工作。牙齒的發(fā)育機(jī)制研究為人工培育牙齒提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。牙齒發(fā)育是一個(gè)長期復(fù)雜的過程,是上皮間充質(zhì)相互誘導(dǎo)的結(jié)果。包括牙胚的發(fā)生、形成、細(xì)胞的分化、基質(zhì)分泌和礦化等幾個(gè)階段�，F(xiàn)在牙齒的形態(tài)發(fā)育已經(jīng)基本研究清楚,但在分子機(jī)制方面,仍有很多待我們探索。在牙本質(zhì)的發(fā)育過程中,牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白發(fā)揮重要作用,主要包括ColⅠ、BSP、OCN、ON、DSPP等蛋白。SLPI為粘膜上皮細(xì)胞分泌的非糖基化單鏈多肽蛋白,包含107個(gè)氨基酸,屬于乳清酸蛋白家族。SLPI由兩條高度同源性的,富含半胱氨酸區(qū)和C末端區(qū)組成,C末端區(qū)具有抑制彈性蛋白酶的作用,N末端區(qū)有抗菌、抗逆轉(zhuǎn)錄病毒和抗炎活性。我們的預(yù)實(shí)驗(yàn)中首次發(fā)現(xiàn)SLPI與牙齒發(fā)育相關(guān)。另外,雖然有基底膜與成牙本質(zhì)細(xì)胞分化相關(guān)的報(bào)道,但SLPI在牙本質(zhì)發(fā)育過程中有什么作用?通過什么樣的分子機(jī)制實(shí)現(xiàn)?尚不清楚。因此,有必要對SLPI在成牙本質(zhì)細(xì)胞分化、基底膜降解與牙本質(zhì)發(fā)生中的作用機(jī)制的機(jī)理進(jìn)行深入的探討,以揭示其分子作用機(jī)制,為牙齒發(fā)育不全和牙本質(zhì)發(fā)育不全的干預(yù)治療以及牙齒修復(fù)與再生提供實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)。本論文以永生化小鼠成牙本質(zhì)細(xì)胞MDPC-23細(xì)胞和小鼠為模型,建立了SLPI基因過表達(dá)和沉默的穩(wěn)定細(xì)胞株,并利用SLPI基因敲除型和野生型小鼠研究SLPI牙齒發(fā)育中的作用和機(jī)制,為牙齒再生研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果:1、通過無縫克隆法構(gòu)建鼠源SLPI基因過表達(dá)載體p LVX-SLPI-IRES-Zs Green1,用T4連接法構(gòu)建鼠源SLPI基因沉默載體p LVX-SLPI-sh RNA2。2、將所構(gòu)建的質(zhì)粒進(jìn)行慢病毒包裝,感染MDPC-23細(xì)胞,通過流式分選得到穩(wěn)定細(xì)胞株,RT-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所構(gòu)建質(zhì)粒中SLPI m RNA的表達(dá)情況,確認(rèn)鼠源SLPI基因過表達(dá)和沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系構(gòu)建成功。3、通過茜素紅染色實(shí)驗(yàn)和RT-PCR實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)SLPI過表達(dá)促進(jìn)MDPC-23細(xì)胞分化礦化,內(nèi)源性SLPI促進(jìn)OCN、ON、ColⅠ、DSPP m RNA的表達(dá),抑制BSP m RNA的表達(dá);基底膜促進(jìn)成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化礦化,SLPI促進(jìn)OCN、ON、ColⅠ、DSPP m RNA的表達(dá),抑制BSP m RNA的表達(dá)。4、通過對野生型和SLPI敲除型小鼠的發(fā)育牙組織進(jìn)行免疫組化和馬森三色染色實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),SLPI促進(jìn)OCN、ColⅠ蛋白的表達(dá)以及基底膜降解,抑制BSP、DSPP蛋白的表達(dá),ON表達(dá)量始終很低,SLPI表達(dá)消失時(shí),基底膜也消失。后續(xù)仍需進(jìn)一步優(yōu)化基底膜鋪板條件,并對基底膜與牙髓干細(xì)胞分化展開研究。
【圖文】：

圖 1.1 牙齒發(fā)育的不同階段Figure 1.1 Different stages of tooth development考第九版的“McDonald and Avery Dentistry for the Child and Adolescen在分子機(jī)制方面，仍有許多問題需要我們?nèi)ヌ剿鳌Ｑ芯勘砻鳎姸?齒 發(fā) 育 的 調(diào) 控 。 其 中 最 主 要 的 有 SHH(sonic hedgehog) 家less-related MMTV integration site)家族， FGF(fibroblast growth fac-β(transforming growth factor-β)家族。SHH 家族在牙齒發(fā)育的起始生階段起著重要作用[6, 7]。Wnt 家族在牙齒的形態(tài)發(fā)生及礦化中有作用[8]。FGF 家族在牙齒發(fā)育過程中起著調(diào)控細(xì)胞增殖、遷移、分[9]。TGF-β 家族促進(jìn)牙齒的分化、礦化以及牙本質(zhì)的形成[10, 11]。此uscle segmenthomeobox)基因、Lef1(lymphoid enhancer-binding fac

圖 1.2 SLPI 的氨基酸序列和三維結(jié)構(gòu)[33]Figure 1.2 Amino acid sequence and 3D structure of SLPI本質(zhì)細(xì)胞是由牙乳頭細(xì)胞分化而成的一種終末細(xì)胞，具有分泌牙本促使其礦化的功能，其功能異常可導(dǎo)致牙本質(zhì)形成缺陷，牙齒發(fā)育們的前期研究中，SLPI 在小鼠的成牙本質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)，成牙本質(zhì)分化和礦化是牙本質(zhì)發(fā)育的重要組成部分，該過程受到多種信號(hào)分，，提示 SLPI 可能與牙本質(zhì)分泌與礦化有關(guān)[35]。我們用永生化小鼠MDPC-23 細(xì)胞系作為模型，來研究 SLPI 在小鼠成牙本質(zhì)細(xì)胞分化作用及其分子機(jī)制。首先研究了外源 SLPI 對 MDPC-23 細(xì)胞的礦化DPC-23 細(xì)胞的礦化[36]。SLPI 通過什么機(jī)制促進(jìn)小鼠成牙本質(zhì)細(xì)胞的分化礦化呢？目前研
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R781.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Xiao-Feng Huang;Yang Chai;;Molecular regulatory mechanism of tooth root development[J];International Journal of Oral Science;2012年04期

2 Afsaneh Rangiani;Zheng-Guo Cao;Ying Liu;Anika Voisey Rodgers;Yong Jiang;Chun-Lin Qin;Jian-Quan Feng;;Dentin matrix protein 1 and phosphate homeostasis are critical for postnatal pulp, dentin and enamel formation[J];International Journal of Oral Science;2012年04期

本文編號(hào)：2659676