【摘要】：目的:通過建立大鼠牙周病及正畸牙移動動物實驗模型,研究各組大鼠實驗牙壓力側(cè)牙周組織和骨密度變化;觀察牙周組織中RANKL、OPG、TNF-α、COX-2的表達及破骨細胞數(shù)目變化規(guī)律;以期探討牛乳鐵蛋白對正畸力下牙周病骨吸收及牙移動骨改建的影響。方法:1.選取健康雄性8-10周齡SD大鼠12只,隨機選取6只大鼠作為實驗組,10%水合氯醛麻醉后,于上頜左側(cè)第一磨牙近中頰根近中及頰側(cè)牙齦注射含10g/L脂多糖(Escherichia coli lipopolysaccharides,E-LPS)的生理鹽水50μl,每48小時注射1次,共4次,剩下6只大鼠作為空白對照組。8天后對比觀察實驗組和對照組大鼠上頜左側(cè)第一磨牙牙齦及牙周組織炎癥情況,并處死所有大鼠,取左上頜牙體-牙周組織聯(lián)合標本,4%多聚甲醛固定,Micro-CT觀察兩組大鼠牙槽骨骨吸收情況,組織病理切片、蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色及破骨細胞計數(shù)檢查牙周病模型制備的效果。2.選取健康雄性8-10周齡SD大鼠52只,隨機分為三組:A組:空白對照組(4只);B組牙周病正畸牙移動模型組(24只);C組正畸牙移動模型組(24只),其中,B組又分為B1組:LPS+正畸力+牛乳鐵蛋白(12只);B2組:LPS+正畸力+生理鹽水(12只),C組又分為C1組:正畸力+牛乳鐵蛋白(12只);C2組:正畸力+生理鹽水(12只)。B組大鼠根據(jù)實驗一牙周病模型制備結(jié)果,于相同位置下注射含10g/L LPS的生理鹽水50μl,每48小時注射1次,共4次。C組大鼠同時在相同部位注射等體積生理鹽水。注射4次后各組均安裝NiTi拉簧裝置,力值20g,自正畸牙移動模型建立第2天開始對B2、C2組大鼠每日灌胃0.9%氯化鈉溶液(1ml/100g)。同時,按照1ml/100g灌胃量,根據(jù)每只大鼠每天接受的牛乳鐵蛋白劑量為85mg/Kg,將牛乳鐵蛋白溶解于相應體積0.9%氯化鈉溶液中對B1、C1組大鼠進行灌胃。在灌胃后的第5天、14天,B1、B2、C1、C2組各處死大鼠6只,共48只,A組大鼠適應性喂養(yǎng)一周后,直接處死取材,各組大鼠處死前取上頜左側(cè)第一磨牙近中齦溝液,ELISA法定量檢測齦溝液乳鐵蛋白含量。取材固定,Micro-CT測量實驗牙近中頰根牙槽骨骨密度、骨小梁等骨組織相關(guān)指標變化。HE染色觀察實驗牙壓力側(cè)牙周組織的變化和牙槽骨吸收情況。TRAP染色觀察實驗牙壓力側(cè)破骨細胞分布與數(shù)量。免疫組織化學染色法觀察實驗牙壓力側(cè)牙周組織中RANKL、OPG、TNF-α、COX-2的表達情況,應用Image-pro-plus6.0圖像分析系統(tǒng)進行半定量分析。采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進行分析和處理。結(jié)果:1.成功建立了大鼠牙周病模型,局部注射大腸桿菌菌株LPS可有效制備大鼠牙周病骨吸收動物模型。2.成功建立了大鼠機械力誘導下的正畸牙移動模型。3.各組大鼠實驗牙近中側(cè)齦溝液中,均檢測到乳鐵蛋白的表達。牛乳鐵蛋白灌胃組和生理鹽水灌胃組分別和空白組相比,其中牛乳鐵蛋白灌胃組齦溝液乳鐵蛋白含量顯著高于空白組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),生理鹽水灌胃組和空白組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.Micro-CT結(jié)果顯示:第5天和第14天,B1組骨小梁數(shù)量(TrabecularNumber,Tb.N)、骨小梁厚度(Trabecular Thickness,Tb.Th)高于B2組,骨表面積和骨體積的比值(Bone Surface/Bone Volume,BS/BV)、骨小梁分離度(Trabecular Separation/Spacing,Tb.Sp)低于B2組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);C1組與C2組相比,Tb.N、Tb.Th、BS/BV和Tb.Sp差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.HE染色結(jié)果顯示:A組未見明顯的破骨細胞和牙槽骨吸收;B組和C組均發(fā)生了較為明顯的壓力側(cè)牙槽骨吸收,B2組較B1組牙槽骨吸收更為嚴重,表現(xiàn)為牙周膜纖維排列紊亂,牙槽骨表面不連續(xù),破骨細胞及骨吸收陷窩形成,結(jié)締組織內(nèi)中性粒細胞、淋巴細胞等炎癥細胞浸潤,C1組和C2組相比沒有明顯區(qū)別。6.TRAP染色結(jié)果顯示,A組TRAP染色陰性,未見明顯的成熟破骨細胞。第5天和14天時,受牛乳鐵蛋白影響,B1組成熟破骨細胞數(shù)顯著低于B2組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);C1、C2組壓力側(cè)可見成熟破骨細胞,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。7.免疫組化結(jié)果顯示:第5天和14天時,B1組RANKL、TNF-α表達量顯著低于B2組(P0.05),B1組OPG表達量高于B2組(P0.05),于第5天達到峰值;C1、C2組相比,第5天和14天,RANKL、TNF-α、COX-2和OPG表達量相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:正畸力下,牛乳鐵蛋白可能通過影響LPS/TLR4/TNF-α通路抑制牙周病相關(guān)骨吸收,但不影響機械力通過COX-2/PGE2通路引起的相關(guān)骨改建。
【圖文】：

近中有明顯的牙槽骨吸收（圖 1-1），牙槽骨高度降低，牙根暴露。空白對照組大鼠左側(cè)上頜骨重建三維影像顯示未見明顯異常骨吸收（圖 1-2）。圖 1-1 牙周病組顯微 CT 三維重建圖Fig1-1 Microscopic CT three-dimensional reconstruction of periodontitis groupPB

正畸力下牛乳鐵蛋白對牙周病骨吸收及牙移動骨改建的影響 2016 級碩士學位論文射 LPS 第 4 次后出現(xiàn)牙周組織紅腫，探診深度增加，觸之易出血，體重稍增加，活動量減少，空白對照組大鼠牙周組織無紅腫，食欲無明顯變化，，體重增加，毛色光亮，活動正常。2.2 Micro-CT 下觀察局部牙槽骨吸收情況實驗組大鼠左側(cè)上頜骨 CT 重建三維影像顯示，上頜第一磨牙頰側(cè)及近中有明顯的牙槽骨吸收（圖 1-1），牙槽骨高度降低，牙根暴露�？瞻讓φ战M大鼠左側(cè)上頜骨重建三維影像顯示未見明顯異常骨吸收（圖 1-2）。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R783.5

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