發(fā)布時(shí)間：2020-05-05 09:55

【摘要】：從唾液和齦溝液中持續(xù)分泌的尿素被口腔細(xì)菌尿素酶快速分解產(chǎn)生氨和二氧化碳。尿素水解的堿性產(chǎn)物通過中和細(xì)菌產(chǎn)酸以維持牙菌斑的中性pH值環(huán)境，有助于穩(wěn)定牙菌斑菌群平衡，，防止牙釉質(zhì)脫礦和促進(jìn)牙釉質(zhì)再礦化。因此，尿素水解被認(rèn)為對防止齲病發(fā)生起到了重要作用。迄今為止，關(guān)于牙菌斑中哪些細(xì)菌具有尿素酶活性以及哪些細(xì)菌決定牙菌斑尿素酶活性的問題尚不清楚，對口腔細(xì)菌尿素酶基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制缺乏認(rèn)識。本研究首先對牙菌斑中常駐細(xì)菌進(jìn)行尿素酶活性檢測，比較細(xì)菌間尿素酶的酶促動(dòng)力學(xué)特征，尋找決定牙菌斑尿素酶活性的關(guān)鍵細(xì)菌。在此基礎(chǔ)上，以內(nèi)氏放線菌作為研究對象，了解細(xì)菌尿素代謝的生物學(xué)特征，模擬內(nèi)氏放線菌在牙菌斑中的生物膜狀態(tài)，探索環(huán)境因素和生存狀態(tài)對細(xì)菌尿素酶活性和尿素酶基因表達(dá)的影響。 方法 采用連續(xù)培養(yǎng)的恒化器模型培養(yǎng)內(nèi)氏放線菌單菌種生物膜，使用酶底物反應(yīng)法和Real-time PCR技術(shù)分別在生化水平和基因水平檢測氮源物質(zhì)、糖源物質(zhì)、pH值和清除率對尿素酶活性和尿素酶UreC基因表達(dá)的影響，同時(shí)比較細(xì)菌在膜狀態(tài)下和浮游狀態(tài)下尿素酶活性和尿素酶UreC基因表達(dá)的差異。 結(jié)果 研究發(fā)現(xiàn)，牙菌斑生物膜中細(xì)菌有活躍的尿素代謝活動(dòng)，唾液鏈球菌，內(nèi)氏放線菌能穩(wěn)定表達(dá)尿素酶活性，血液鏈球菌和粘性放線菌尿素
【圖文】：

四川大學(xué)華西口腔醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文1’“一蘿)塑解謐拭璐2，533.54，555，566，577‘588.599.51010.511PH仇不同pH值下內(nèi)氏放線菌尿素酶活性的變化Fig1.UreaseactiviytofActinomyeeSnaeslundiiatdiefferntPHvalueS隨著尿素底物濃度的增高，內(nèi)氏放線菌尿素酶催化活性迅速增高。當(dāng)尿素濃度增加到50~。FL時(shí)，底物濃度再繼續(xù)增加，催化活性的增加率減小，活性趨于最大值(vmxa)(圖2)。使用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析擬合酶活性倒數(shù)與底物濃度倒數(shù)的直線回歸方程，線性相關(guān)性良好(二0.993)，得到米氏常數(shù)K」11=7.5~olL/。說明在尿素濃度在7.5~。比時(shí)，內(nèi)氏放線菌尿素酶具有50%的最大活性。根據(jù)Lin~vae-rBkur方程式:1瓜二K的叮m[1s+lV/m，得到vmxa=55·6nnlol/瀏而mgecnProetni。經(jīng)計(jì)算，在口腔中正常尿素濃度3一10mmol幾范圍內(nèi)，尿素酶活性大約保持在最大活性的21%~63%。一八U00060心J戎呼、j，工月叫。公。向二工勺。留活叫.繃鵝五瀚毅送》10叁。031020406030100120尿素濃?

2實(shí)驗(yàn)設(shè)備pH控制儀(Jneoc，上海任氏電子有限公司)BTOO一6OOM型八通道蠕動(dòng)泵(保定蘭格恒流泵有限公司)YZ15巧型單通道蠕動(dòng)泵(保定蘭格恒流泵有限公司)PI一600一lpH電極(eJnc，o上海任氏電子有限公司)HX一1050型循環(huán)水浴箱(北京博醫(yī)康技術(shù)有限公司)培養(yǎng)罐(contimiousculurtevessel，四川大學(xué)玻璃儀器制造CJJ一781型磁力加熱攪拌器(江蘇振興儀器廠)HTSPlus多孔板高效分析儀(美國PE公司)紫外光分光光度計(jì)(752C上海第三分析儀器廠)氨試劑盒(北京柏定生物制劑有限公司)MRC一1024ConofealLaserSeanJ苗ngMieorsePoe(BioRad)
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R781.4

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本文編號：2649932