發(fā)布時間：2020-05-03 16:26

【摘要】： 目的:在建立骨膜牽張成骨犬實驗腭裂模型的基礎(chǔ)上,通過自行設(shè)計的鎳鈦記憶合金牽張器對腭裂裂隙緣的骨膜進行牽張,檢測不同時期激活素A(activin,ACT A)和卵泡抑素(follistatin,FS)mRNA的表達,探討ACT A/F S系統(tǒng)對腭裂邊緣骨膜牽張成骨修復的調(diào)節(jié)模式,同時觀察不同時期新骨形成的結(jié)構(gòu)特點,研究新骨形成的連續(xù)過程及規(guī)律,對骨膜牽張成骨修復腭裂的機理進行初步探討。 材料與方法: 本研究分為兩個部分: 1.犬硬腭骨膜牽張成骨術(shù)中激活素A和卵泡抑素表達的研究 1.1選用健康雜種幼犬15只,手術(shù)建立骨膜牽張成骨的犬實驗腭裂模型,并于腭裂模型制作后兩個月,于腭裂裂隙緣骨膜下安放鎳鈦合金骨膜牽張器,以鈦釘固定,牽張器即以250±20g牽張力持續(xù)牽引骨膜。 1.2在骨膜牽張器放置后10、20、30、40和60天,各處死3只動物,切取牽張側(cè)的新生骨組織及對照側(cè)骨切開處未牽張的骨組織提取RNA,用RT-PCR檢測ACTA、FSmRNA各時期的表達。 2.腭裂緣骨膜牽張成骨的新骨形成研究 2.1選用健康雜種幼犬10R,其中8只動物的手術(shù)及牽張器的放置方法同第一部分,2只動物不作任何處理。 2.2在骨膜牽張器放置后20、30、40和60天,各處死動物2只,共8只,骨膜牽張器放置一側(cè)為實驗組,未放置一側(cè)為對照組。另2只不作任何處理動物為空白對照組,于飼養(yǎng)60天后處死。在處死動物前14天和前3天肌肉注射四環(huán)素(50 mg/kg),處死后切取含實驗組新骨組織、對照組以及空白對照組骨組織的0.5cm×1cm大小骨塊,采用硬組織骨切片技術(shù),進行組織學分析和骨組織計量學動態(tài)參數(shù)檢測,探討新骨形成規(guī)律。 結(jié)果:(1)RT-PCR實驗結(jié)果:對照側(cè)骨切開未牽張的骨組織10至60天標本檢測出少量ACT A和FS mRNA,各組間比較無明顯統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。牽張側(cè)的新骨組織在骨膜牽張器放置后10天已有ACT A和FS mRNA的表達,隨著骨膜牽張器放置時間延長,ACT A和FS mRNA的表達量逐漸上升,骨膜牽張器放置后20、30、40及60天ACT A mRNA表達量分別為lO天的1.78、2.82、4.27及3.04倍;骨膜牽張器放置后20、30、40及60天FS mRNA表達量分別為10天的1.52、2.12、2.47及1.90倍。牽張側(cè)ACT A mRNA的表達量10天與20天標本比較,差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05);10天與30、40及60天標本比較,差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);20天與30天標本比較,差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05);20天與40、60天標本比較,差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);30天與40、60天標本比較,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);40與60天標本比較,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。牽張側(cè)FSmRNA的表達量10天與20天標本比較,差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05);10天與30、40及60天標本比較,差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);20天與30、40、60天標本比較,差異均無統(tǒng)計學意義(p＞0.05):30天與40、60天標本比較,差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05);40與60天標本比較,差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。ACT A mRNA表達量對照側(cè)與牽張側(cè)10天樣本比較,差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05);對照側(cè)與牽張側(cè)20天樣本比較,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);對照側(cè)與牽張側(cè)30、40、60天樣本比較,差異有非常顯著意義(p＜0.01)。FS mRNA的表達量對照側(cè)與牽張側(cè)10、20天樣本比較,差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05);對照側(cè)與牽張側(cè)30、40、60天樣本比較,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);(2)腭裂模型的裂隙緣骨膜受牽張后,最終在骨膜下形成了新骨。組織學觀察結(jié)果顯示了新生骨在成骨細胞數(shù)量上的增長,以及膠原纖維和骨小梁排列方向上的變化。大量沿牽張方向排列的膠原纖維組織在增生成骨細胞作用下,鈣化沉積為新骨,并逐漸改建成熟;(3)四環(huán)素熒光標記結(jié)果:在骨膜牽張器放置后不同牽張時期熒光標記帶長度及面積上的變化,熒光亮度由弱變強,雙標記線由無到有,雙標間距由窄變寬,顯示了新骨形成過程的一個動態(tài)變化規(guī)律;(4)骨組織計量學動態(tài)參數(shù)測量結(jié)果:對照組在靠近骨切開處僅見少量散在熒光帶分布,未見有明顯四環(huán)素雙標線形成;實驗組20、30、40及60天四環(huán)素雙標平均間距分別為:46.07±0.58μm、77.36±2.5μm、97.18±1.6μm、115.2±2.91μm,各組間比較差異有非常顯著意義(p＜0.01);實驗組20、30、40及60天平均礦化沉積率分別為:4.18±0.05μm/d、7.03±0.23μm/d、8.83±0.15μm/d、10.47±0.2μm/d,各組間比較差異有非常顯著意義(p＜0.01)。 結(jié)論:在犬硬腭骨膜牽張過程中ACT A可能通過直接或間接方式增強膜內(nèi)成骨,FS參與對ACT A生物活性的調(diào)節(jié),ACT A/F S系統(tǒng)起重要調(diào)節(jié)作用。新骨形成是沿牽張方向的膜內(nèi)成骨方式完成的,在骨膜牽張器放置20天牽張區(qū)已有新骨形成,隨著牽張時間延長成骨量逐漸增加,40天的成骨活動最活躍,至60天時新骨鈣化程度較成熟,以骨改建和塑形為主。本研究通過制造腭裂的動物模型后,在腭裂的裂隙緣安放自行設(shè)計的鎳鈦記憶合金牽張器,經(jīng)過鎳鈦合金的記憶效應牽張骨膜,以原位產(chǎn)生新骨,最終在骨膜下形成新骨,表明了骨膜牽張能夠在口腔頜面部形成一定的新骨。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R782

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